| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩写词表 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-21页 |
| 1 病原特性 | 第13-14页 |
| 2 临床症状与病理变化 | 第14页 |
| 3 鸭病毒性肝炎的诊断 | 第14-17页 |
| ·临床症状及病理特征 | 第14页 |
| ·病毒的分离 | 第14-15页 |
| ·病毒中和试验(Virus-neutralization test,VN) | 第15页 |
| ·电镜检测 | 第15-16页 |
| ·荧光抗体技术 | 第16页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第16页 |
| ·其他血清学方法 | 第16-17页 |
| ·免疫胶体金诊断技术 | 第17页 |
| ·分子生物学诊断技术 | 第17页 |
| 4 鸭肝炎病毒的纯化 | 第17-18页 |
| 5 单克隆抗体技术在DHV检测方面优势及应用 | 第18-19页 |
| 6 目的意义 | 第19-21页 |
| 试验一 DHV抗原的鉴定与纯化 | 第21-31页 |
| 1 材料与方法 | 第21-23页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·毒株 | 第21页 |
| ·DHV阳性血清 | 第21页 |
| ·试验鸭胚、动物 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-23页 |
| ·病毒的增殖 | 第21-22页 |
| ·鸭胚半数致死量(DELD_(50))的测定(殷震,2003) | 第22页 |
| ·鸭胚中和试验 | 第22页 |
| ·DHV的纯化 | 第22-23页 |
| ·雏鸭回归试验 | 第23页 |
| 2 结果 | 第23-29页 |
| ·DHV的攻毒结果 | 第23-25页 |
| ·鸭胚半数致死量(DELD_(50)) | 第25-26页 |
| ·鸭胚中和试验结果 | 第26页 |
| ·病毒纯化结果 | 第26-29页 |
| ·尿囊液初步纯化后结果 | 第26-27页 |
| ·DEAE_(52)纤维素层析柱层析 | 第27页 |
| ·电镜观察结果 | 第27页 |
| ·雏鸭回归试验结果 | 第27-29页 |
| 3 讨论 | 第29-31页 |
| ·鸭肝炎病毒的增殖 | 第29页 |
| ·鸭肝炎病毒的纯化 | 第29-31页 |
| 试验二 DHV单克隆抗体的制备 | 第31-59页 |
| 1 材料和方法 | 第31-44页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31-32页 |
| ·抗原、试验动物及细胞 | 第32页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第32页 |
| ·BALB/c小鼠的免疫 | 第32-33页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第33-35页 |
| ·抗原最佳包被浓度和抗体最佳工作浓度的确定 | 第33页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第33-34页 |
| ·最佳一抗反应时间的确定 | 第34-35页 |
| ·最佳酶标二抗反应时间的确定 | 第35页 |
| ·细胞融合 | 第35-40页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞的准备 | 第35-36页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第37页 |
| ·免疫脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞的融合 | 第37页 |
| ·阳性孔的筛选(双筛) | 第37-38页 |
| ·杂交瘤阳性细胞的克隆化 | 第38-39页 |
| ·单克隆抗体的制备及纯化 | 第39-40页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第40-44页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的检测 | 第40页 |
| ·单克隆抗体亚型的鉴定 | 第40页 |
| ·单克隆抗体纯化效果的检测 | 第40页 |
| ·单克隆抗体效价的测定 | 第40-41页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第41-42页 |
| ·单克隆抗体的表位特异性检测 | 第42-43页 |
| ·单克隆抗体相对亲和力的测定 | 第43-44页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存复苏 | 第44页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性测定 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-50页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第44-46页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第46页 |
| ·McAb的纯化效果检测 | 第46-47页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的结果分析 | 第47页 |
| ·McAb的亚类鉴定 | 第47-49页 |
| ·细胞培养液上清及腹水效价 | 第49页 |
| ·McAb特异性鉴定结果 | 第49页 |
| ·McAb的表位特异性检测 | 第49页 |
| ·McAb的相对亲和力 | 第49-50页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性测定 | 第50页 |
| 3 讨论 | 第50-59页 |
| ·动物免疫 | 第50-52页 |
| ·细胞融合过程中应注意的几个问题 | 第52-54页 |
| ·杂交瘤细胞株的筛选 | 第54-55页 |
| ·杂交瘤细胞克隆化培养的讨论 | 第55-56页 |
| ·细胞冻存 | 第56页 |
| ·腹水的制备 | 第56页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第56-57页 |
| ·关于在杂交瘤细胞制备过程中污染问题 | 第57页 |
| ·关于单克隆抗体进行鉴定 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 研究生期间发表的论文和参编的书籍 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |