| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-29页 |
| 1 猪传染性胸膜肺炎的危害 | 第11页 |
| 2 猪传染性胸膜肺炎疫苗 | 第11-18页 |
| ·灭活疫苗 | 第11-12页 |
| ·亚单位疫苗 | 第12-13页 |
| ·弱毒活疫苗 | 第13-15页 |
| ·ghosts疫苗 | 第15-16页 |
| ·口服疫苗 | 第16-18页 |
| 3 猪支原体肺炎 | 第18-24页 |
| ·猪肺炎支原体免疫相关蛋白 | 第18-20页 |
| ·P46 | 第18-19页 |
| ·P65 | 第19页 |
| ·P74 | 第19页 |
| ·细胞溶质蛋白P36 | 第19-20页 |
| ·猪肺炎支原体的粘附因子 | 第20-21页 |
| ·P97 | 第20页 |
| ·P110 | 第20-21页 |
| ·其它粘附因子 | 第21页 |
| ·热休克蛋白 | 第21-22页 |
| ·Hsp60 | 第21页 |
| ·Hsp42 | 第21-22页 |
| ·猪支原体肺炎疫苗研究现状 | 第22-24页 |
| ·常规疫苗 | 第22页 |
| ·基因工程疫苗 | 第22-24页 |
| ·核苷酸还原酶(NrdF)的R2亚基重组疫苗 | 第22-23页 |
| ·表达文库免疫(Expression library immunization,ELI) | 第23页 |
| ·粘附因子相关疫苗的研究 | 第23页 |
| ·DNA疫苗 | 第23-24页 |
| ·肽疫苗 | 第24页 |
| 4.猪传染性胸膜肺炎和支原体肺炎的混合感染和防制 | 第24-25页 |
| 5.环介导的核酸恒温扩增(LAMP) | 第25-29页 |
| ·LAMP的原理 | 第25-26页 |
| ·循环扩增反应启始物的形成 | 第25-26页 |
| ·循环扩增反应 | 第26页 |
| ·LAMP的操作步骤 | 第26-27页 |
| ·反应体系 | 第26-27页 |
| ·操作程序 | 第27页 |
| ·LAMP技术的优点 | 第27-28页 |
| ·灵敏度高 | 第27页 |
| ·特异性强 | 第27页 |
| ·所需时间短 | 第27页 |
| ·设备简单 | 第27页 |
| ·产物检测便捷 | 第27-28页 |
| ·LAMP的应用 | 第28-29页 |
| ·病毒病原体的检测 | 第28页 |
| ·细菌病原体的检测 | 第28页 |
| ·寄生虫病的检测 | 第28-29页 |
| 第2章 胸膜肺炎放线杆菌血清10型弱毒株的构建 | 第29-48页 |
| 1.研究目的和意义 | 第29页 |
| 2.材料与方法 | 第29-39页 |
| ·试验材料 | 第29-34页 |
| ·细菌菌株 | 第29页 |
| ·载体与质粒 | 第29-30页 |
| ·主要药品及试剂 | 第30-31页 |
| ·主要培养基和抗生素 | 第31-32页 |
| ·引物 | 第32页 |
| ·缓冲液 | 第32-33页 |
| ·质粒提取用缓冲液 | 第32页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液 | 第32-33页 |
| ·Western blot缓冲液 | 第33页 |
| ·细菌基因组DNA提取试剂 | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态制备用试剂 | 第33页 |
| ·其它缓冲液及试剂 | 第33-34页 |
| ·实验动物 | 第34页 |
| ·试验方法 | 第34-39页 |
| ·猪肺炎支原体主要免疫原性基因P36基因的扩增 | 第34页 |
| ·细菌活化 | 第34页 |
| ·细菌(APP)基因组DNA提取 | 第34-35页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第35页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第35页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·质粒的小量制备(改良的碱裂解法) | 第36页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第36-37页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌电转化感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌电转化 | 第37页 |
| ·接合转移 | 第37-38页 |
| ·突变株的鉴定 | 第38页 |
| ·溶血性试验 | 第38页 |
| ·毒素Apx Ⅰ的提取 | 第38页 |
| ·Western blot | 第38-39页 |
| ·间接荧光抗体试验(IFA) | 第39页 |
| ·小鼠毒力测定 | 第39页 |
| ·保护力测定 | 第39页 |
| 3.结果与分析 | 第39-44页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌apxICA基因的PCR扩增 | 第39页 |
| ·肺炎支原体P36基因的PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pEICALDH的构建 | 第40-41页 |
| ·基因工程突变株的电转化法筛选 | 第41页 |
| ·基因工程突变株的接合转移法筛选 | 第41-42页 |
| ·基因工程突变株PCR鉴定 | 第42页 |
| ·基因工程突变株生物学特性 | 第42-44页 |
| ·突变菌株丧失溶血活性 | 第42-43页 |
| ·P36基因与毒素IA的表达 | 第43页 |
| ·突变株对小鼠的毒力下降 | 第43-44页 |
| ·免疫鼠获得抵抗胸膜肺炎亲本菌株攻击的能力 | 第44页 |
| 4.讨论 | 第44-48页 |
| ·细菌载体的选择 | 第44-45页 |
| ·APP10型菌作为亲本株的优点 | 第45-46页 |
| ·肺炎支原体基因的表达 | 第46页 |
| ·突变株构建的策略 | 第46-47页 |
| ·直接电转化 | 第46页 |
| ·SacB筛选 | 第46-47页 |
| ·细菌接合转移 | 第47页 |
| ·展望 | 第47-48页 |
| 第3章 环介导的App apxⅣ恒温扩增法的建立 | 第48-54页 |
| 1.研究目的和意义 | 第48页 |
| 2.材料与方法 | 第48-50页 |
| ·试验材料 | 第48页 |
| ·细菌菌株 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·试验方法 | 第48-50页 |
| ·引物设计 | 第48-49页 |
| ·细菌培养 | 第49-50页 |
| ·模板的制备 | 第50页 |
| ·LAMP扩增 | 第50页 |
| ·Nested PCR | 第50页 |
| ·特异性检测 | 第50页 |
| ·敏感性检测 | 第50页 |
| 3.结果与分析 | 第50-52页 |
| ·LAMP扩增 | 第50-51页 |
| ·Nested PCR扩增 | 第51页 |
| ·LAMP产物视觉直接观察 | 第51页 |
| ·特异性检测 | 第51-52页 |
| ·敏感性检测 | 第52页 |
| 4.讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61页 |