| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-23页 |
| ·水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的研究概况 | 第12-17页 |
| ·水稻条纹叶枯病的基础生物学研究概况 | 第12页 |
| ·RSV的分子生物学研究 | 第12-17页 |
| ·RSV的分类地位 | 第12页 |
| ·RSV粒体形态 | 第12-13页 |
| ·RSV的基因组结构与功能 | 第13-16页 |
| ·RNA1区段 | 第14页 |
| ·RNA2区段 | 第14-15页 |
| ·RNA3区段 | 第15-16页 |
| ·RNA4区段 | 第16页 |
| ·RSV的分子变异 | 第16页 |
| ·水稻条纹叶枯病的防治 | 第16-17页 |
| ·蛋白质研究进展 | 第17-22页 |
| ·外源基因表达 | 第17-20页 |
| ·RSV的原核表达 | 第18页 |
| ·真核表达 | 第18页 |
| ·杆状病毒—昆虫细胞表达系统 | 第18-20页 |
| ·杆状病毒昆虫细胞表达系统研究概况 | 第18-19页 |
| ·杆状病毒与细胞凋亡 | 第19-20页 |
| ·蛋白质功能研究 | 第20-22页 |
| ·蛋白质与核酸互作 | 第20-21页 |
| ·蛋白质间相互作用的研究 | 第21页 |
| ·蛋白质的亚细胞定位 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 RSV五个基因真核“AcMNPV-sf9昆虫细胞”表达体系的建立 | 第23-50页 |
| ·材料与方法 | 第23-32页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·病毒 | 第23页 |
| ·昆虫 | 第23页 |
| ·菌株 | 第23页 |
| ·质粒 | 第23页 |
| ·试剂及仪器 | 第23-25页 |
| ·方法 | 第25-32页 |
| ·常规克隆 | 第25-28页 |
| ·水稻病叶总RNA的提取 | 第25页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第25-26页 |
| ·DNA片段的切胶纯化 | 第26页 |
| ·PCR扩增产物和pMD18-T克隆载体的连接 | 第26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·连接反应物对宿主感受态细胞的转化 | 第27页 |
| ·质粒提取 | 第27页 |
| ·重组克隆的PCR筛选 | 第27页 |
| ·重组克隆的酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·AcMNPV-sf9细胞真核表达体系(步骤见图2-3，示意图见附录4) | 第28-32页 |
| ·重组AcMNPV穿梭质粒的构建及鉴定(bacmid转座原理示意图见附录5) | 第29页 |
| ·核苷酸序列测定 | 第29-30页 |
| ·收获重组AcMNPV | 第30页 |
| ·噬菌斑纯化鉴定实验 | 第30页 |
| ·重组蛋白的表达纯化 | 第30页 |
| ·纯化蛋白抗血清的制备 | 第30-31页 |
| ·Western blotting鉴定 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-45页 |
| ·AcMNPV转移载体pFastBacHTb及穿梭载体bacmid鉴定 | 第32-33页 |
| ·sf9细胞及其生长曲线 | 第33-34页 |
| ·构建重组AcMNPV转移质粒pFastBacHTb-X | 第34-36页 |
| ·重组AcMNPV穿梭质粒的构建与鉴定 | 第36-39页 |
| ·重组RSV蛋白的表达 | 第39-44页 |
| ·rb-X转染sf9昆虫细胞 | 第39页 |
| ·重组AcMNPV的收集、纯化和扩增 | 第39-40页 |
| ·优化表达时间 | 第40-44页 |
| ·NS_3特异性抗血清的制备 | 第44-45页 |
| ·NS_3的纯化 | 第44-45页 |
| ·间接ELISA法测定抗血清效价 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-50页 |
| ·RSV蛋白的获取 | 第45-46页 |
| ·表达体系的选择 | 第46-47页 |
| ·影响表达的因素 | 第47-49页 |
| ·通过真核表达制备RSV各蛋白的抗血清 | 第49-50页 |
| 第三章 GFP-SP、GFP-CP融合基因在sf9细胞中的表达 | 第50-66页 |
| ·材料与方法 | 第50-52页 |
| ·病毒，载体，昆虫和试剂 参见第一章 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-52页 |
| ·常规克隆方法 | 第50页 |
| ·病叶总RNA提取 | 第50页 |
| ·PCR与overlap-PCR | 第50-51页 |
| ·重组AcMNPV转移质粒pFastBacHTb-GFP、pFastBacHTb-GFP-CP和pFast-GFP-SP的构建 | 第51-52页 |
| ·重组AcMNPV穿梭质粒的构建与鉴定 | 第52页 |
| ·sf9份细胞的培养、转染与观察 | 第52页 |
| ·重组AcMNPV粒子的收获及鉴定 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-63页 |
| ·绿色荧光蛋白GFP的活化 | 第52-53页 |
| ·构建重组AcMNPV转移质粒PFastBacHTb-GFP-X | 第53-54页 |
| ·重组AcMNPV穿梭质粒的构建及鉴定 | 第54-55页 |
| ·GFP-SP融合蛋白在sf9昆虫细胞中的表达 | 第55-60页 |
| ·GFP-SP融合蛋白在sf9细胞中的激光共聚焦观察 | 第60-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| ·overlap-PCR的应用 | 第63-64页 |
| ·包涵体的形成 | 第64页 |
| ·重组质粒与细胞凋亡 | 第64-65页 |
| ·SP的亚细胞定位 | 第65-66页 |
| 第四章 全文总结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录1 缩写词英汉对照 | 第76-78页 |
| 附录2 本研究使用的主要试剂与溶液的配制 | 第78-82页 |
| 附录3 实验所用“AcMNPV-sf9昆虫细胞”表达系统示意图培养 | 第82-83页 |
| 附录4 穿梭质粒bacmid转座原理示意图 | 第83-84页 |
| 附录5 sf9昆虫细胞培养 | 第84-85页 |
| 附录6 缓冲体系及咪唑浓度参考表 | 第85-86页 |
| 附录7 RSV各蛋白的分泌性预测结果 | 第86-87页 |
| 附录8 本研究构建的序列 | 第87-91页 |
| 附录9 RSV NS_2、NS_3、CP、SP和NSvc_4蛋白的亚细胞定位预测 | 第91-92页 |
| 附录10 overlap-PCR原理示意图 | 第92-93页 |
| 附录11 攻博期间发表(投稿)的论文目录 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
