| 提要 | 第1-10页 |
| 英文缩写一览表 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-23页 |
| 一、激活素的分类及结构 | 第13页 |
| 二、激活素的功能 | 第13-20页 |
| 1. 诱导胚胎中胚层形成 | 第14页 |
| 2. 对造血作用的影响 | 第14页 |
| 3. 调节卵泡颗粒细胞分化 | 第14页 |
| 4. 影响胎盘功能 | 第14-15页 |
| 5. 调节成骨细胞功能 | 第15页 |
| 6. 诱导肝细胞凋亡 | 第15页 |
| 7. 在感染中的作用 | 第15-16页 |
| 8. 参与创伤修复 | 第16页 |
| 9. 激活素在乳腺组织中的表达及其可能作用 | 第16-18页 |
| 10. 激活素在乳腺癌发生中的可能作用及其机制 | 第18-20页 |
| 三、本研究的目的及意义 | 第20-23页 |
| 材料与方法 | 第23-36页 |
| 一、实验材料 | 第23-24页 |
| （一） 菌株、质粒及细胞 | 第23页 |
| （二） 主要生化及分子生物学试剂 | 第23-24页 |
| （三） 动物 | 第24页 |
| （四） 主要仪器设备 | 第24页 |
| 二、实验方法 | 第24-36页 |
| （一） 激活素N 末端基因的原核表达 | 第24-28页 |
| 1. ActA-N 末端cDNA 片段的钓取 | 第24-26页 |
| 2. pET-28a（+）/ActA-N 原核表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 3. ActA-N 蛋白的表达与纯化 | 第27-28页 |
| 4. ActA-N 蛋白的浓缩与保存 | 第28页 |
| （二） ActA-N 蛋白多克隆抗体制备 | 第28-30页 |
| 1. 家兔的免疫 | 第28-29页 |
| 2. 家兔耳血的采集 | 第29页 |
| 3. 家兔耳血抗体效价间接ELISA 方法检测 | 第29-30页 |
| 4. 家兔ActA-N 抗血清的收集和保存 | 第30页 |
| （三） 免疫组织化学染色法检测肿瘤组织中激活素A 的表达 | 第30-31页 |
| （四） 激活素βA 基因真核表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 1. 激活素βA 基因序列编码区的克隆 | 第31-32页 |
| 2. pcDNA3.1/ActβA 重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| （五） ActβA 在哺乳动物细胞中的表达 | 第33-35页 |
| 1. 重组质粒的大量制备 | 第33-34页 |
| 2. 重组质粒DNA 的纯度与浓度测定 | 第34页 |
| 3. 细胞培养与瞬时转染 | 第34页 |
| 4. 细胞质蛋白提取物的制备 | 第34页 |
| 5. ActβA 蛋白的Western Blot 分析 | 第34-35页 |
| （六） 激活素A 对细胞增殖能力的影响 | 第35-36页 |
| 1. 细胞形态观察 | 第35页 |
| 2. 细胞生长曲线的绘制 | 第35页 |
| 3. 细胞的无血清培养 | 第35-36页 |
| 实验结果 | 第36-48页 |
| 一、ActA-N 末端基因的原核表达 | 第36-40页 |
| 1. pMD18-T/ActA-N 克隆质粒的构建 | 第36页 |
| 2. pET-28a（+）/ActA-N 重组质粒的构建 | 第36-38页 |
| 3. pET-28a（+）/ActA-N 重组质粒的诱导表达 | 第38-39页 |
| 4. 诱导表达时间的选择 | 第39-40页 |
| 二、（His）_6/ActA-N 融合蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| 1. （His）_6/ActA-N 蛋白的亲和层析纯化 | 第40页 |
| 2. ActA-N 融合蛋白的浓缩 | 第40-41页 |
| 三、ActA-N 融合蛋白抗体的制备及鉴定 | 第41页 |
| 四、激活素βA 亚单位在乳腺及乳腺癌组织中的表达 | 第41-45页 |
| 1. 激活素βA 的表达与乳腺良恶性肿瘤的相关性 | 第42页 |
| 2. 激活素βA 的表达与乳腺癌组织学分类的相关性 | 第42-43页 |
| 3. 激活素βA 的表达与乳腺癌转移的相关性 | 第43-44页 |
| 4. 激活素βA 的表达与乳腺癌临组织学分级的相关性 | 第44页 |
| 5. 激活素βA 的表达与乳腺癌大小的相关性 | 第44-45页 |
| 五、激活素βA 基因真核表达载体的构建 | 第45-48页 |
| 1. 激活素βA cDNA 序列的PCR 扩增 | 第45页 |
| 2. pcDNA3.1/ActβA 重组质粒的构建 | 第45-46页 |
| 3. . pcDNA3.1/ActβA 重组质粒在乳腺癌细胞系 MDA-MB-231 中的 表达 | 第46-47页 |
| 4. 超表达ActβA 对乳腺癌细胞系MDA-MB-231 细胞增殖能力影响 | 第47-48页 |
| 讨论 | 第48-52页 |
| 结论 | 第52-64页 |
| 参考文献 | 第64-76页 |
| 在攻读博士学位期间发表论文 | 第76-77页 |
| 中文摘要 | 第77-79页 |
| 英文摘要 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
