| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-30页 |
| 1.微生物杀虫农药研究背景 | 第10页 |
| 2.苏云金芽胞杆菌概述 | 第10-11页 |
| 3.苏云金芽胞杆菌毒素种类 | 第11-12页 |
| 4.苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白 | 第12-17页 |
| ·杀虫晶体蛋白基因的命名和分类 | 第12-16页 |
| ·杀虫晶体蛋白的基本特征 | 第16页 |
| ·杀虫晶体蛋白的结构特征 | 第16-17页 |
| 5.苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的作用机理 | 第17-20页 |
| ·杀虫晶体蛋白与昆虫细胞膜上受体的结合 | 第18-19页 |
| ·杀虫晶体蛋白引起膜穿孔的分子机制 | 第19页 |
| ·杀虫晶体蛋白导致细胞裂解的机制 | 第19-20页 |
| 6.苏云金芽胞杆菌的研究应用现状 | 第20-23页 |
| ·寻找苏云金芽胞杆菌新资源和发掘新的杀虫基因 | 第20-21页 |
| ·苏云金芽胞杆菌工程菌的构建和应用 | 第21页 |
| ·苏云金芽胞杆菌安全性方面的研究 | 第21-22页 |
| ·苏云金芽胞杆菌融合基因的研究 | 第22-23页 |
| 7.球孢白僵菌的概述 | 第23页 |
| 8.球孢白僵菌的杀虫机理 | 第23-24页 |
| 9.球孢白僵菌杀虫毒蛋白 | 第24-25页 |
| 10.Red/ET同源重组技术 | 第25-29页 |
| 11.实验目的和意义 | 第29-30页 |
| 材料与方法 | 第30-44页 |
| 1.材料 | 第30-35页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·培养基和抗生素 | 第30-32页 |
| ·试剂和仪器设备 | 第32-35页 |
| 2.方法 | 第35-44页 |
| ·球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的克隆 | 第35-39页 |
| ·球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的表达 | 第39-40页 |
| ·Red/ET同源重组构建表达载体pHT-crylAc-CDEP2 | 第40-41页 |
| ·重组菌株Cry ~-B-pHT-crylAc-CDEP2的构建 | 第41页 |
| ·多克隆抗体的制备和检测 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白的Western blot检测 | 第42-43页 |
| ·重组菌株的杀虫毒力生测 | 第43-44页 |
| 结果与分析 | 第44-60页 |
| 1.球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的克隆 | 第44-50页 |
| ·球孢白僵菌总RNA的提取 | 第44页 |
| ·RT-PCR合成CDEP2基因的cDNA双链 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pMD-CDEP2的筛选和鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒pMD-CDEP2测序结果和同源性分析 | 第46-49页 |
| ·重组质粒pET-CDEP2的筛选和鉴定 | 第49-50页 |
| 2.球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的表达 | 第50-52页 |
| ·SDS-PAGE检测诱导表达的目的蛋白 | 第50页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第50-52页 |
| 3.表达载体pHT-crylAc-CDEP2的构建 | 第52-55页 |
| ·Red/ET同源重组材料的制备 | 第52-53页 |
| ·表达载体pHT-crylAc-CDEP2的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·融合基因片段上下游序列分析 | 第54-55页 |
| 4.重组菌株Cry ~-B-pHT-crylAc-CDEP2的构建 | 第55-57页 |
| ·重组菌株Cry~-B-pHT-crylAc-CDEP2的菌落PCR鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组菌株Cry~-B-pHT-crylAc-CDEP2的SDS-PAGE检测 | 第56-57页 |
| 5.融合蛋白的Western blot检测 | 第57-59页 |
| 6.重组菌株的杀虫毒力生测 | 第59-60页 |
| 讨论 | 第60-68页 |
| 1.以crylAc基因为基础构建杀虫融合基因的研究 | 第60页 |
| 2.RT-PCR扩增CDEP2基因cDNA序列的方法 | 第60-61页 |
| 3.CDEP2蛋白在大肠杆菌中的表达和多克隆抗体的制备 | 第61-62页 |
| 4.关于两种制备抗原方法的比较 | 第62-63页 |
| 5.融合基因表达系统的构建策略 | 第63-64页 |
| 6.融合蛋白形成晶体的研究 | 第64-65页 |
| 7.Red/ET同源重组技术的应用 | 第65页 |
| 8.融合蛋白的毒理研究 | 第65-66页 |
| 9.总结 | 第66-68页 |
| 结论 | 第68-70页 |
| 1.球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶新基因CDEP2的克隆和表达 | 第68页 |
| 2.CDEP2多克隆抗体的制备 | 第68页 |
| 3.Red/ET同源重组技术 | 第68页 |
| 4.融合基因的克隆和表达 | 第68页 |
| 5.苏云金芽胞杆菌工程菌株的毒力生测 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 附录 | 第78-79页 |
| 本人在硕士研究生期间撰写、发表和参与课题相关的科研成果和学术论文 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
