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抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的制备及定量抗原ELISA检测方法的建立

摘要第1-4页
Abstract第4-11页
1 引言第11-24页
   ·IFN-Γ的基因结构及理化性质第11-12页
   ·IFN-Γ对免疫应答的调节第12-14页
   ·IFN-Γ抗病毒机理第14-15页
   ·IFN-Γ抗肿瘤活性第15页
   ·IFN-Γ的生物合成第15-16页
   ·IFN-Γ在疾病诊断和免疫学检测方面的应用第16-20页
   ·IFN-Γ在临床上的应用概况第20-22页
   ·鸡IFN-Γ的研究进展第22-23页
   ·本研究的目的和意义第23-24页
2 试验内容第24-53页
   ·抗鸡IFN-Γ单克隆抗体的制备和鉴定第24-38页
     ·试验材料第24页
       ·主要仪器与设备第24页
       ·试验动物第24页
       ·质粒、菌株及细胞系第24页
       ·培养基及主要试剂第24页
     ·试验方法第24-32页
       ·抗原制备第24-28页
       ·动物免疫第28页
       ·细胞融合第28-29页
       ·阳性杂交瘤细胞的筛选第29-30页
       ·阳性杂交瘤细胞的克隆化、冻存和复苏第30页
       ·间接ELISA 最佳工作条件的确定第30-31页
       ·单克隆抗体腹水制备第31页
       ·单克隆抗体的特异性鉴定第31-32页
       ·单克隆抗体亚型的鉴定第32页
       ·腹水效价的测定第32页
     ·结果第32-36页
       ·原核表达RCHIFN-Γ蛋白的鉴定第32-33页
       ·重组杆状病毒RBAC-CHIFN-Γ的PCR 鉴定第33页
       ·杂交瘤细胞株的获得第33页
       ·WESTERN-BLOT 检测抗单克隆抗体特异性第33-34页
       ·抗病毒活性阻断试验分析(单抗中和试验)第34-35页
       ·间接ELISA 最佳工作条件的确定第35页
       ·单抗腹水效价的测定和亚型鉴定第35-36页
     ·讨论第36-38页
   ·抗鸡IFN-Γ单克隆抗体的纯化及抗原定量ELISA 方法的建立第38-48页
     ·试验材料第38页
       ·主要试剂第38页
       ·主要仪器与耗材第38页
     ·试验方法第38-41页
       ·腹水中IGG 抗体的提取第38-39页
       ·腹水中IGG 抗体的辣根过氧化物酶(HRP)标记第39页
       ·腹水中IGG 抗体的生物素标记第39-40页
       ·昆虫细胞表达RCHIFN-Γ抗病毒活性的滴定第40页
       ·定量ELISA 的建立及标准曲线的绘制第40-41页
       ·最小检出浓度的确定第41页
       ·特异性试验第41页
       ·重复性和稳定性试验第41页
     ·结果第41-46页
       ·抗体IGG 纯化结果第41-42页
       ·HRP 标记抗体的鉴定结果第42-43页
       ·生物素标记腹水中IGG 抗体的检测结果第43页
       ·RCHIFN-Γ蛋白抗病毒活性测定第43-44页
       ·定量ELISA 的建立及标准曲线的绘制第44页
       ·最小检出浓度的确定第44-45页
       ·特异性试验结果第45-46页
       ·重复性和稳定性试验第46页
     ·讨论第46-48页
   ·应用抗鸡γ-干扰素单抗初步建立胞内细胞因子染色(ICC)第48-53页
     ·试验材料第48页
       ·试验动物第48页
       ·细胞系及主要试剂第48页
     ·试验方法第48-49页
       ·腹水中IGG 抗体的荧光(FITC)标记第48页
       ·利用流式细胞仪检测总淋巴细胞的Γ-干扰素第48-49页
     ·结果第49-52页
       ·FITC 标记抗体的检测结果第49-50页
       ·利用流式细胞仪检测总淋巴细胞的Γ-干扰素结果第50-52页
     ·讨论第52-53页
3 结论第53-54页
致谢第54-55页
参考文献第55-61页
附录第61-65页
作者简介第65页

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