| 第1章 文献综述 | 第1-25页 |
| 1 噬菌体展示技术 | 第12-15页 |
| ·噬菌体展示技术(PDT)的原理 | 第12-13页 |
| ·噬菌体展示系统(Phage display system,PDS) | 第13-15页 |
| 2 噬菌体抗体库技术 | 第15-16页 |
| ·噬菌体抗体库的分类及优缺点 | 第15-16页 |
| ·构建噬菌体抗体文库的技术路线 | 第16页 |
| ·噬菌体单链抗体文库构建方法 | 第16页 |
| 3 噬菌体抗体文库的筛选 | 第16-18页 |
| ·筛选方法 | 第16-18页 |
| ·筛选效率的检测 | 第18页 |
| 4 提高噬菌体抗体亲和力的方法 | 第18-19页 |
| ·定点诱变 | 第18-19页 |
| ·链置换 | 第19页 |
| 5 噬菌体抗体的种类及应用前景 | 第19-21页 |
| ·Fab片段 | 第19页 |
| ·ScFv | 第19-20页 |
| ·双特异性抗体(Bispecifica Antibody,BsAb) | 第20-21页 |
| 6 鸡噬菌体抗体库的研究进展 | 第21-23页 |
| ·鸡免疫球蛋白及其结构 | 第21-22页 |
| ·鸡Ig基因多样性的形成机制 | 第22-23页 |
| ·鸡IgY的优点 | 第23页 |
| ·鸡噬菌体抗体库的研究进展 | 第23-25页 |
| 第2章 绪论 | 第25-27页 |
| 1 研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 2 研究范围和内容 | 第26-27页 |
| 第3章 鸡IGY SCFV PDT文库的构建 | 第27-39页 |
| 1 材料 | 第27-29页 |
| ·试验动物 | 第27页 |
| ·菌株和克隆载体 | 第27页 |
| ·试剂和酶 | 第27页 |
| ·仪器 | 第27-29页 |
| 2 方法 | 第29-34页 |
| ·鸡单链抗体ScFv基因的构建 | 第29-32页 |
| ·ScFv基因SacI和NotI酶切 | 第32页 |
| ·T7phageDNA经SacI、NotI双酶切 | 第32-33页 |
| ·重组子T7select10-3b／ScFv的连接 | 第33页 |
| ·重组子T7select10-3b／ScFv的体外包装 | 第33页 |
| ·文库库容的测定 | 第33-34页 |
| ·文库的扩增 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-36页 |
| ·总RNA的纯度及浓度 | 第34页 |
| ·鸡IgY V_H、V_L、V_H-Linker、VL-Linker和V_H-Linker-V_L PCR产物 | 第34页 |
| ·SacI和NotI双酶切鸡IgY V_H-Linker-V_L DNA | 第34-35页 |
| ·SacI和NotI双酶切T7 phage vector | 第35-36页 |
| ·鸡IgY V_H-Linker-V_L DNA重组T7 phage展示文库库容测定 | 第36页 |
| ·扩增文库的库容 | 第36页 |
| 4.分析与讨论 | 第36-39页 |
| ·鸡ScFv基因文库多样性 | 第36页 |
| ·总RNA的提取及质量 | 第36-37页 |
| ·ScFv插入T7Select10-3b载体 | 第37-38页 |
| ·鸡ScFv基因中Linker的意义 | 第38-39页 |
| 第4章 鸡IGY SCFV T7 PDT文库的鉴定和筛选 | 第39-52页 |
| 1 材料 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要器材 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-42页 |
| ·PCR检测鸡IgY ScFv T7 PDT文库插入的ScFv基因片段 | 第39-40页 |
| ·生物淘洗(Biopanning) | 第40-42页 |
| ·T7-AIV和T7-GPV抗体基因序列分析 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-50页 |
| ·鸡IgY ScFv PDT文库外源基因PCR鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·1A和1B克隆外源基因序列及同源性分析 | 第43-46页 |
| ·鸡IgY ScFv(△V_H)PDT文库的生物淘洗结果 | 第46-47页 |
| ·T7-AIV和T7-GPV阻断ELISA检测结果 | 第47页 |
| ·AIV和GPV抗原筛选的抗体基因序列同源性分析 | 第47-49页 |
| ·A-1和G-3的ScV_L抗体氨基酸序列同源性分析 | 第49-50页 |
| 4 分析与讨论 | 第50-52页 |
| ·文库插入子的鉴定 | 第50页 |
| ·鸡IgYScV_LT7 PDT生物淘洗 | 第50-51页 |
| ·鸡IgY ScFv T7PDT文库中V_H基因缺失原因分析 | 第51-52页 |
| 第5章 鸡抗GPV SCV_L的原核表达 | 第52-63页 |
| 1 材料 | 第52页 |
| ·菌种和载体 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-57页 |
| ·GPV ScVL抗体在E.coli中的表达 | 第52-54页 |
| ·pET28b／ScV_L诱导表达 | 第54-56页 |
| ·竞争ELISA检测pET28b／ScV_L／G-31表达产物 | 第56-57页 |
| 3 结果 | 第57-61页 |
| ·重组子pET28b／ScV_L转化试验 | 第57-58页 |
| ·ScV_L表达产物SDS-PAGE结果 | 第58-59页 |
| ·ScV_L／G-3表达蛋白质含量测定 | 第59页 |
| ·竞争性ELISA检测ScV_L／G-3表达蛋白质抗体活性 | 第59-61页 |
| 4 分析与讨论 | 第61-63页 |
| ·ScV_L／G-3在E.coli中成功表达,并为可溶性蛋白 | 第61页 |
| ·ScV_L抗体活性 | 第61-63页 |
| 第6章 鸡IGY V_A多态性分析 | 第63-67页 |
| 1 方法 | 第63-64页 |
| ·鸡IgY V_λ基因序列基因多态性分析 | 第63页 |
| ·鸡V_L氨基酸序列分析 | 第63-64页 |
| 2 结果分析与讨论 | 第64-67页 |
| ·关于13个克隆V-J基因DNA序列 | 第64-65页 |
| ·关于鸡IgYV_L氨基酸序列与CDRs | 第65-66页 |
| ·关于单轻链抗体亲和力 | 第66-67页 |
| 第7章 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录： | 第74-83页 |
| 附录一 鸡噬菌体抗体库部分克隆测序报告 | 第74-77页 |
| 附录二 试剂配制 | 第77-81页 |
| 附录三 缩略词 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 发表论文及参加课题一览表 | 第84页 |
