| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-30页 |
| ·研究背景 | 第10-11页 |
| ·文献综述 | 第11-29页 |
| ·芪合酶的研究进展 | 第11-21页 |
| ·芪合酶基因 | 第11-16页 |
| ·芪合酶基因启动子 | 第16-17页 |
| ·芪合酶基因的诱导表达 | 第17-20页 |
| ·芪合酶与查尔酮合酶的进化关系 | 第20-21页 |
| ·植物启动子 | 第21-23页 |
| ·植物启动子的结构特征 | 第21-22页 |
| ·启动子的应用情况 | 第22-23页 |
| ·启动子的选用和改造 | 第23页 |
| ·基于PCR技术研究未知基因—染色体步行(chromosome walking) | 第23-29页 |
| ·反向PCR(IPCR) | 第23-24页 |
| ·随机引物PCR(RP-PCR) | 第24-25页 |
| ·连接介导PCR(LM-PCR) | 第25-28页 |
| ·染色体步行小结 | 第28-29页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第29页 |
| ·本研究的技术路线 | 第29-30页 |
| 第2章 马尾松银松素合酶基因cDNA的克隆 | 第30-48页 |
| ·前言 | 第30页 |
| ·材料与方法 | 第30-38页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·菌株、质粒载体、引物 | 第30页 |
| ·酶、抗生素及各种试剂盒 | 第30-31页 |
| ·仪器设备 | 第31页 |
| ·常用试剂或缓冲液配制 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-38页 |
| ·马尾松总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·马尾松PS基因的RT—PCR | 第32-34页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第34页 |
| ·PSR基因的PCR产物的克隆及测序 | 第34-37页 |
| ·序列测定及分析 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-45页 |
| ·马尾松总RNA的提取结果 | 第38页 |
| ·RT-PCR结果 | 第38-39页 |
| ·重组菌的筛选及鉴定 | 第39页 |
| ·序列测定及分析 | 第39-45页 |
| ·小结与讨论 | 第45-48页 |
| 第3章 马尾松银松素合酶基因DNA的克隆 | 第48-58页 |
| ·前言 | 第48页 |
| ·材料与方法 | 第48-52页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·植物材料 | 第48页 |
| ·菌株、质粒载体、引物 | 第48页 |
| ·酶、抗生素及各种试剂盒 | 第48-49页 |
| ·仪器设备 | 第49页 |
| ·常用试剂或缓冲液的配制 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-52页 |
| ·马尾松总DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·PCR反应 | 第50页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第50-51页 |
| ·PSD基因PCR产物的克隆 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-56页 |
| ·马尾松总DNA的提取结果 | 第52-53页 |
| ·PSD基因的PCR扩增结果 | 第53页 |
| ·重组菌的筛选及鉴定 | 第53-54页 |
| ·序列测定及分析 | 第54-56页 |
| ·小结与讨论 | 第56-58页 |
| 第4章 马尾松银松素合酶基因的上游调控区的克隆及分析 | 第58-86页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·锚定PCR方法 | 第58-68页 |
| ·材料与方法 | 第58-64页 |
| ·实验材料 | 第58-60页 |
| ·方法 | 第60-64页 |
| ·马尾松总DNA的提取 | 第60页 |
| ·第一次锚定PCR | 第60-62页 |
| ·第一次锚定PCR产物的克隆 | 第62-64页 |
| ·第二次锚定PCR及其产物克隆 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-68页 |
| ·马尾松总DNA的提取结果 | 第64-65页 |
| ·第一次锚定PCR的扩增结果 | 第65-67页 |
| ·单引物扩增结果 | 第65页 |
| ·双引物扩增结果 | 第65-66页 |
| ·PCR产物克隆后检测结果 | 第66页 |
| ·序列测定与分析 | 第66-67页 |
| ·第二次锚定PCR扩增结果 | 第67-68页 |
| ·双链接头介导PCR的染色体步行方法 | 第68-83页 |
| ·材料与方法 | 第68-77页 |
| ·实验材料 | 第68-69页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·菌株、质粒载体、引物 | 第68页 |
| ·酶、抗生素及各种试剂盒 | 第68页 |
| ·仪器设备 | 第68页 |
| ·常用试剂或缓冲液的配制 | 第68-69页 |
| ·方法 | 第69-77页 |
| ·马尾松总DNA的提取(SDS法) | 第69-70页 |
| ·第一次双链接头介导PCR的染色体步行 | 第70-74页 |
| ·第二次双链接头介导PCR的染色体步行 | 第74-77页 |
| ·结果与分析 | 第77-83页 |
| ·马尾松总DNA的提取结果 | 第77页 |
| ·双链接头介导的染色体步行结果 | 第77-83页 |
| ·马尾松总DNA酶切结果 | 第77-78页 |
| ·第一次染色体步行结果 | 第78-79页 |
| ·第二次染色体步行结果 | 第79-80页 |
| ·两次染色体步行结果的序列测定与分析 | 第80-83页 |
| ·小结与讨论 | 第83-86页 |
| 第5章 马尾松银松素合酶基因上游调控区的功能分析—缺失表达载体构建 | 第86-95页 |
| ·前言 | 第86页 |
| ·材料与方法 | 第86-91页 |
| ·实验材料 | 第86-88页 |
| ·植物材料 | 第86页 |
| ·菌株、质粒载体、引物 | 第86-87页 |
| ·酶、抗生素及各种试剂盒 | 第87页 |
| ·仪器设备 | 第87页 |
| ·常用试剂或缓冲液的配制 | 第87-88页 |
| ·方法 | 第88-91页 |
| ·PS上游调控区全长片断与GUS融合植物表达载体的构建 | 第88-89页 |
| ·PS启动子5′端缺失片段与GUS融合植物表达载体的构建 | 第89页 |
| ·表达载体转化大肠杆菌及其检测 | 第89-90页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第90-91页 |
| ·农杆菌EHA105感受态细胞的制备 | 第90-91页 |
| ·电击转化农杆菌EHA105 | 第91页 |
| ·结果与分析 | 第91-93页 |
| ·PS上游调控区全长片断与GUS融合表达载体的构建结果 | 第91-92页 |
| ·PS启动子5′端缺失片段与GUS融合表达载体的构建结果 | 第92-93页 |
| ·小结与讨论 | 第93-95页 |
| 第6章 马尾松银松素合酶基因的植物正义表达载体构建及其转化烟草 | 第95-108页 |
| ·前言 | 第95页 |
| ·材料与方法 | 第95-102页 |
| ·实验材料 | 第95-96页 |
| ·植物材料 | 第95页 |
| ·菌种、质粒、引物 | 第95页 |
| ·试剂与主要仪器 | 第95-96页 |
| ·方法 | 第96-102页 |
| ·菌株pCAMBIA1301和PMD18T-PSR2的活化与质粒提取 | 第96页 |
| ·PS基因的PCR扩增与纯化 | 第96-97页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第97-99页 |
| ·pMDPSZ与pCAMBIA1301的酶切与回收 | 第99-100页 |
| ·PS基因与pCAMBIA1301载体的连接与转化 | 第100页 |
| ·植物表达载体转化烟草 | 第100-102页 |
| ·结果与分析 | 第102-105页 |
| ·PS基因的扩增结果 | 第102页 |
| ·PS基因与表达载体pCAMBIA1301的酶切 | 第102页 |
| ·重组菌的筛选及鉴定 | 第102-103页 |
| ·测序鉴定结果 | 第103页 |
| ·植物表达载体转化烟草结果 | 第103-105页 |
| ·烟草的遗传转化及再生 | 第103-104页 |
| ·转基因烟草PCR鉴定 | 第104-105页 |
| ·小结与讨论 | 第105-108页 |
| 结论 | 第108-110页 |
| 附录 符号缩略表 | 第110-116页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 个人简历 | 第120-122页 |
| 福建师范大学学位论文使用授权声明 | 第122页 |
