| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| 1 红曲与红曲霉 | 第13-21页 |
| ·红曲 | 第13页 |
| ·曲霉 | 第13-15页 |
| ·红曲霉的生物学特征 | 第13-14页 |
| ·红曲霉的分类 | 第14-15页 |
| ·曲霉代谢产物 | 第15-21页 |
| ·红曲色素 | 第15-17页 |
| ·莫纳可林(monacolin)类物质 | 第17-18页 |
| ·抗菌活性物质 | 第18-20页 |
| ·酶类活性物质 | 第20页 |
| ·其他代谢产物 | 第20-21页 |
| 2 红曲中的桔霉素 | 第21-25页 |
| ·桔霉素的危害 | 第21-22页 |
| ·桔霉素的合成 | 第22页 |
| ·桔霉素的检测 | 第22-24页 |
| ·抑菌圈法 | 第22-23页 |
| ·薄层层析法(TLC) | 第23页 |
| ·酶联免疫吸附法(ELISA) | 第23页 |
| ·高效液相色谱法(HPLC) | 第23-24页 |
| ·控制红曲中桔霉素含量的方法 | 第24-25页 |
| ·菌种选育 | 第24页 |
| ·优化发酵条件 | 第24-25页 |
| ·产桔霉素相关基因的研究 | 第25页 |
| 3 红曲霉基因工程技术 | 第25-30页 |
| ·红曲霉遗传转化研究 | 第25-28页 |
| ·电击法 | 第26页 |
| ·限制性酶介导的整合(REMI)技术 | 第26-27页 |
| ·农杆菌介导的转化(ATMT) | 第27-28页 |
| ·TAIL-PCR分离T-DNA侧翼未知序列 | 第28-30页 |
| 4 本课题研究目的与意义 | 第30-31页 |
| 第二章 农杆菌介导的红曲霉转化库的构建及转化子的形态观察 | 第31-45页 |
| 1 材料与方法 | 第31-35页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·菌种 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·主要仪器与设备 | 第32页 |
| ·几种试剂的配制 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-35页 |
| ·农杆菌介导的红曲霉转化 | 第33-34页 |
| ·转化子的形态观察 | 第34页 |
| ·转化子遗传稳定性分析 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-42页 |
| ·红曲霉转化库的构建 | 第35页 |
| ·转化子的菌落形态观察 | 第35-42页 |
| ·转化子的遗传稳定性分析 | 第42页 |
| 3 讨论 | 第42-45页 |
| 第三章 红曲霉转化库中桔霉素突变子的筛选 | 第45-59页 |
| 1 材料与方法 | 第45-47页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·菌种 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器与设备 | 第45-46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-47页 |
| ·桔霉素的抑菌圈法检测 | 第46页 |
| ·菌落中桔霉素的提取 | 第46-47页 |
| ·红曲的制备及桔霉素提取 | 第47页 |
| ·桔霉素的高效液相色谱(HPLC)分析 | 第47页 |
| ·红曲色价的测定 | 第47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-56页 |
| ·桔霉素HPLC检测方法的建立 | 第48-50页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第48页 |
| ·方法的准确度及精密度分析 | 第48页 |
| ·标样和样品的色谱行为 | 第48-50页 |
| ·菌落中桔霉素产生规律的研究 | 第50-51页 |
| ·桔霉素突变子的筛选 | 第51-55页 |
| ·桔霉素突变子的抑菌圈法初筛 | 第51-52页 |
| ·桔霉素突变子的HPLC复筛 | 第52-53页 |
| ·桔霉素突变子的验证 | 第53-55页 |
| ·桔霉素突变子的色价分析 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-59页 |
| ·桔霉素的抑菌圈法检测 | 第56页 |
| ·桔霉素的HPLC检测 | 第56-57页 |
| ·红曲霉转化库的筛选 | 第57-59页 |
| 第四章 红曲霉产桔霉素相关基因的TAIL-PCR克隆 | 第59-73页 |
| 1 材料与方法 | 第59-66页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·菌种 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·主要仪器设备 | 第60页 |
| ·几种试剂的配制 | 第60页 |
| ·酶和试剂盒 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-66页 |
| ·红曲霉基因组的提取 | 第60-61页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第61-62页 |
| ·T-DNA侧翼未知序列的TAIL-PCR扩增 | 第62-65页 |
| ·TAIL-PCR产物的连接转化及测序分析 | 第65-66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-70页 |
| ·红曲霉基因组质量分析 | 第66-67页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第67-68页 |
| ·T-DNA侧翼未知序列的TAIL-PCR扩增 | 第68-69页 |
| ·TAIL-PCR扩增产物的测序及序列分析 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-73页 |
| 结论与讨论 | 第73-77页 |
| 1 结论 | 第73-74页 |
| 2 讨论 | 第74-75页 |
| 3 创新点及今后的研究内容 | 第75-77页 |
| ·创新点 | 第75页 |
| ·今后的研究内容 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 附录1 TAIL-PCR测序结果 | 第85-88页 |
| 附录2 读研期间发表的论文 | 第88页 |