| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-31页 |
| ·概述 | 第12页 |
| ·肌红蛋白的结构特征 | 第12-13页 |
| ·肌红蛋白的功能 | 第13-14页 |
| ·Mb的储氧功能 | 第13页 |
| ·Mb的过氧化物酶活性 | 第13-14页 |
| ·肌红蛋白的应用 | 第14-15页 |
| ·用肌红蛋白作为过氧化物酶模拟酶的有关应用 | 第14-15页 |
| ·肌红蛋白在医学方面的应用 | 第15页 |
| ·肌红蛋白(Mb)结构与功能的研究现状 | 第15-25页 |
| ·氨基酸选择突变 | 第15-20页 |
| ·血红素化学修饰 | 第20页 |
| ·氨基酸选择突变和血红素修饰相结合 | 第20-21页 |
| ·非天然辅基引入 | 第21-25页 |
| ·PCR定点突变 | 第25-27页 |
| ·圆二色性光谱法 | 第27-29页 |
| ·生物大分子分离纯化方法 | 第29-30页 |
| ·凝胶过滤层析(GC) | 第29页 |
| ·离子交换层析(IEC) | 第29页 |
| ·疏水作用层析(HIC) | 第29页 |
| ·金属离子亲和层析(IMAC) | 第29-30页 |
| ·本论文的工作 | 第30-31页 |
| 2 突变体Mb(D44K)的构建 | 第31-43页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·实验仪器 | 第31页 |
| ·实验试剂 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·引物的设计与合成 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-39页 |
| ·质粒提取 | 第32-34页 |
| ·PCR定点突变 | 第34-36页 |
| ·PCR产物的回收 | 第36页 |
| ·酶切载体和目的基因 | 第36-37页 |
| ·酶切反应物的精制 | 第37页 |
| ·载体与目的基因的连接 | 第37页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·转化 | 第38页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第38-39页 |
| ·DNA测序 | 第39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 3 突变体Mb(D44K)的表达、分离与纯化 | 第43-48页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·菌株和质粒 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·实验试剂及缓冲液 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·蛋白质的表达 | 第43-44页 |
| ·总蛋白溶液的获取 | 第44-45页 |
| ·总蛋白的粗提 | 第45页 |
| ·肌红蛋白的精制 | 第45-46页 |
| ·肌红蛋白浓度的测定 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 4 肌红蛋白结构稳定性的研究 | 第48-56页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·实验试剂 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49页 |
| ·热诱导的Mb(WT)和Mb(D44K)去折叠研究 | 第49页 |
| ·酸性pH介导的Mb(WT)和Mb(D44K)去折叠研究 | 第49页 |
| ·盐酸胍诱导的Mb(WT)和Mb(D44K)去折叠研究 | 第49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-55页 |
| ·温度对Mb(WT)和Mb(D44K)结构稳定性影响的CD光谱 | 第49-53页 |
| ·酸变性对Mb(WT)和Mb(D44K)结构稳定性影响的CD光谱 | 第53页 |
| ·盐酸胍对Mb(WT)和Mb(D44K)结构稳定性影响的UV-vis光谱 | 第53-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 5 肌红蛋白过氧化物酶活性的研究 | 第56-63页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·实验仪器 | 第56页 |
| ·实验试剂 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-58页 |
| ·过氧化物酶活性测定的原理 | 第57页 |
| ·Mb(WT)及Mb(D44K)的过氧化物酶活性的测定 | 第57页 |
| ·愈创木酚Krn的测定 | 第57页 |
| ·Mb(WT)及Mb(D44K)过氧化物酶的最适反应温度和热稳定性 | 第57-58页 |
| ·Mb(WT)及Mb(D44K)过氧化物酶的最适反应pH值和对pH的稳定性 | 第58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-62页 |
| ·愈创木酚Km的测定 | 第58页 |
| ·Mb(WT)及Mb(D44K)过氧化物酶的最适反应温度和热稳定性 | 第58-60页 |
| ·Mb(WT)及Mb(D44K)过氧化物酶的最适反应pH值和对pH的稳定性 | 第60-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 6.结论与展望 | 第63-64页 |
| ·结论 | 第63页 |
| ·创新点 | 第63页 |
| ·展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录A 缩略语表 | 第68-69页 |
| 附录B 肌红蛋白质粒图 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 大连理工大学学位论文版权使用授权书 | 第72页 |
