| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1. 动物疥螨病研究进展 | 第10-21页 |
| ·流行病学 | 第10-11页 |
| ·生物学 | 第11-12页 |
| ·生活史 | 第11页 |
| ·生活习性 | 第11-12页 |
| ·治病作用与临床症状 | 第12-13页 |
| ·病理变化 | 第13-14页 |
| ·组织病理学变化 | 第13页 |
| ·血液的病理学变化 | 第13-14页 |
| ·免疫学 | 第14-15页 |
| ·抗原研究 | 第14页 |
| ·疥螨引起的免疫应答 | 第14-15页 |
| ·疥螨的分子生物学 | 第15-19页 |
| ·疥螨遗传学研究 | 第15页 |
| ·疥螨cDNA文库的构建 | 第15-16页 |
| ·疥螨表达序列标签(EST)分析 | 第16页 |
| ·疥螨的抗原基因 | 第16-19页 |
| ·副肌球蛋白 | 第16-17页 |
| ·载脂蛋白 | 第17-18页 |
| ·谷胱甘肽S转移酶 | 第18页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶 | 第18-19页 |
| ·原肌球蛋白 | 第19页 |
| ·诊断 | 第19-21页 |
| ·病原学诊断 | 第19-20页 |
| ·免疫学诊断 | 第20-21页 |
| ·血凝抑制实验 | 第20页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第20页 |
| ·聚合酶链反应(PCR) | 第20-21页 |
| ·治疗 | 第21页 |
| ·展望 | 第21页 |
| 2 本试验的目的意义 | 第21-23页 |
| 第二章 疥螨原肌球蛋白的克隆、原核表达与蛋白定位研究 | 第23-58页 |
| 引言 | 第23-24页 |
| 1 材料与方法 | 第24-40页 |
| ·试验材料 | 第24-26页 |
| ·试验样品来源 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·菌株及质粒载体 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·主要溶液的配制 | 第24-26页 |
| ·主要生物信息数据库和计算机软件 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-40页 |
| ·兔疥螨的采集与纯化 | 第26页 |
| ·形态学观察鉴定 | 第26页 |
| ·疥螨原肌球蛋白的克隆 | 第26-30页 |
| ·疥螨总RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·原肌球蛋白基因的RT-PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR产物的回收 | 第28-29页 |
| ·目的基因的连接及转化 | 第29页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第29页 |
| ·目的基因序列的测定 | 第29-30页 |
| ·疥螨原肌球蛋白基因的原核表达载体构建 | 第30-33页 |
| ·表达引物的设计 | 第30页 |
| ·表达基因的亚克隆 | 第30页 |
| ·重组T克隆质粒的构建 | 第30页 |
| ·原肌球蛋白的T克隆质粒的提取与酶切 | 第30-32页 |
| ·pET32a(+)质粒的提取与酶切 | 第32页 |
| ·酶切回收的原肌球蛋白质粒与pET32a(+)质粒的连接与转化 | 第32页 |
| ·重组表达质粒双酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组表达质粒测序鉴定 | 第33页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-Tm在大肠杆菌中的诱导表达 | 第33-36页 |
| ·重组蛋白的表达和样品的制备 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第33-35页 |
| ·诱导剂IPTG浓度的优化 | 第35页 |
| ·诱导表达时间的优化 | 第35页 |
| ·诱导表达温度的优化 | 第35页 |
| ·表达蛋白的可溶性分析 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·重组pET32a(+)-Tm质粒表达产物免疫印迹 | 第37-38页 |
| ·一抗血清的制备 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第37页 |
| ·表达产物转移至纤维素NC膜(半干式转移) | 第37页 |
| ·免疫印迹 | 第37-38页 |
| ·制备高免血清 | 第38-40页 |
| ·重组蛋白的制备 | 第38页 |
| ·蛋白乳剂苗制备 | 第38页 |
| ·免疫程序 | 第38页 |
| ·间接ELISA检测高免血清的效价 | 第38-39页 |
| ·免疫组织化学 | 第39-40页 |
| 2 结果 | 第40-54页 |
| ·原肌球蛋白的克隆 | 第40-46页 |
| ·原肌球蛋白的PCR扩增 | 第40页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第40页 |
| ·重组克隆质粒的序列鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第41-42页 |
| ·疥螨原肌球蛋白的蛋白质生物信息学分析 | 第42-46页 |
| ·原肌球蛋白基因的碱基组成分析 | 第42-43页 |
| ·氨基酸翻译和蛋白质组分分析 | 第43-44页 |
| ·重组原肌球蛋白的信号肽位点预测 | 第44-45页 |
| ·蛋白质跨膜区预测 | 第45-46页 |
| ·蛋白质疏水性分析 | 第46页 |
| ·疥螨原肌球蛋白基因的亚克隆 | 第46-48页 |
| ·加酶切位点引物的PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pMD19-T-Tm的PCR与酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·疥螨原肌球蛋白基因重组表达质粒的构建与鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组表达质粒的序列鉴定 | 第49页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第49页 |
| ·重组质粒表达条件的优化 | 第49-51页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第49-50页 |
| ·诱导时间的优化 | 第50-51页 |
| ·诱导温度的优化 | 第51页 |
| ·重组表达蛋白可溶性分析 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白表达产物纯化结果 | 第52-53页 |
| ·融合蛋白表达产物免疫印迹结果 | 第53页 |
| ·免疫组织化学 | 第53-54页 |
| 3. 讨论 | 第54-58页 |
| 第三章 结论与创新点 | 第58-59页 |
| 1 结论 | 第58页 |
| 2 创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
