| 致谢 | 第1-12页 |
| 英文缩略词 | 第12-13页 |
| 中文摘要 | 第13-16页 |
| 英文摘要 | 第16-19页 |
| 第一章 前言(综述) | 第19-82页 |
| 1 卵巢恶性肿瘤研究进展 | 第19-54页 |
| ·卵巢恶性肿瘤的遗传学研究进展 | 第19-25页 |
| ·染色体异常与卵巢癌 | 第19-20页 |
| ·与卵巢癌相关的基因改变 | 第20-25页 |
| ·癌基因 | 第20-22页 |
| ·抑癌基因 | 第22-25页 |
| ·耐药相关蛋白 | 第25页 |
| ·卵巢癌预后因素的研究概述 | 第25-34页 |
| ·临床病理与卵巢癌预后因素的关系 | 第25-27页 |
| ·临床分期与预后的关系 | 第25-27页 |
| ·组织学类型、分级与预后的关系 | 第27页 |
| ·临床治疗与卵巢癌预后因素的关系 | 第27-30页 |
| ·手术方式及术后残余灶与预后的关系 | 第28-29页 |
| ·卵巢上皮性癌一线化疗方案及疗程与预后的关系 | 第29页 |
| ·卵巢癌综合治疗与预后的关系 | 第29-30页 |
| ·与卵巢癌预后相关的分子生物学因素 | 第30-34页 |
| ·癌基因和抑癌基因表达变化与卵巢癌预后因素的关系 | 第30-31页 |
| ·肿瘤转移相关基因与卵巢癌预后因素的关系 | 第31页 |
| ·生长因子与生长因子受体与卵巢癌预后因素的关系 | 第31-32页 |
| ·细胞周期调控因子与卵巢癌预后因素的关系 | 第32页 |
| ·细胞凋亡基因与卵巢癌预后因素的关系 | 第32-33页 |
| ·血清相关因子与卵巢癌预后因素的关系 | 第33-34页 |
| ·卵巢恶性肿瘤的治疗概况 | 第34-54页 |
| ·恶性肿瘤的手术治疗 | 第34-39页 |
| ·I 期卵巢上皮性癌全面分期探查术 | 第34-35页 |
| ·肿瘤细胞减灭术 | 第35-36页 |
| ·二次剖腹探查术 | 第36-37页 |
| ·复发肿瘤的手术治疗 | 第37-38页 |
| ·腹腔镜在卵巢癌治疗中的应用 | 第38-39页 |
| ·保留生育功能的手术 | 第39页 |
| ·卵巢癌的化学治疗 | 第39-44页 |
| ·Ⅰ期卵巢癌的化疗 | 第39-40页 |
| ·晚期卵巢癌化疗 | 第40-41页 |
| ·卵巢癌腹腔化疗 | 第41-42页 |
| ·复发性卵巢癌化疗 | 第42-43页 |
| ·卵巢癌的先期化疗 | 第43-44页 |
| ·卵巢恶性肿瘤的生物治疗 | 第44-54页 |
| ·基因治疗 | 第44-52页 |
| ·免疫治疗 | 第52-54页 |
| 2 卵巢恶性肿瘤的侵袭和转移 | 第54-67页 |
| ·卵巢癌病灶转移的临床特征 | 第54-57页 |
| ·腹腔种植 | 第54-55页 |
| ·淋巴转移 | 第55-56页 |
| ·卵巢癌转移的预后 | 第56-57页 |
| ·肿瘤侵袭转移步骤 | 第57-59页 |
| ·肿瘤侵袭-肿瘤细胞从原发瘤进入循环系统 | 第58页 |
| ·肿瘤转移-肿瘤细胞从循环系统进入继发器官 | 第58-59页 |
| ·卵巢恶性肿瘤浸润转移的分子机理 | 第59-67页 |
| ·基因调控与肿瘤侵袭转移 | 第59-62页 |
| ·粘附分子与卵巢恶性肿瘤浸润转移 | 第62-64页 |
| ·血管生成与卵巢恶性肿瘤的侵袭转移 | 第64-65页 |
| ·肿瘤血管生成(angiogenesi)的过程 | 第64页 |
| ·血管生成调节因子 | 第64页 |
| ·血管生成促进肿瘤生长和扩散的可能机制 | 第64-65页 |
| ·血管生成与卵巢恶性肿瘤 | 第65页 |
| ·纤维蛋白溶解酶及其调节因子与卵巢恶性肿瘤的侵袭转移 | 第65-66页 |
| ·基质金属蛋白酶及其抑制剂与卵巢肿瘤的侵袭转移 | 第66-67页 |
| 3 基质金属蛋白酶及其组织抑制剂与卵巢癌侵袭转移的关系 | 第67-78页 |
| ·细胞外基质(ECM)的结构 | 第67页 |
| ·基膜( BMs) | 第67页 |
| ·间隙结缔组织( ICT) | 第67页 |
| ·基质金属蛋白酶(MMPS) 简介 | 第67-71页 |
| ·MMPs 家族 | 第67-69页 |
| ·MMPs 结构域 | 第69-70页 |
| ·MMPs 的生理学功能 | 第70-71页 |
| ·基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPS)简介 | 第71页 |
| ·MMPS 和TIMPS 的调节 | 第71-73页 |
| ·MMPs 的激活 | 第71-72页 |
| ·TIMPs 对MMPs 活性的调节 | 第72-73页 |
| ·MMPs 的转录水平调节 | 第73页 |
| ·TIMPS 对MMPS 在卵巢肿瘤中的表达 | 第73-75页 |
| ·与病理类型和组织分级的关系 | 第74页 |
| ·与临床分期的关系 | 第74页 |
| ·与预后的关系 | 第74-75页 |
| ·MMPS 和TIMPS 在肿瘤侵袭和转移中的作用 | 第75-78页 |
| ·降解细胞外基质 | 第75-76页 |
| ·在新生血管形成中的作用 | 第76-78页 |
| ·调节细胞粘附 | 第78页 |
| 4 卵巢肿瘤侵袭转移治疗研究现状及展望 | 第78-82页 |
| ·血管生成抑制剂 | 第78-79页 |
| ·细胞粘附因子抑制剂 | 第79页 |
| ·金属蛋白酶抑制剂 | 第79-80页 |
| ·以MMPS 为靶子的基因治疗 | 第80-82页 |
| 第二章 基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在卵巢恶性肿瘤组织中的表达 | 第82-108页 |
| 1 材料和方法 | 第82-91页 |
| ·临床资料 | 第82-83页 |
| ·组织标本 | 第82页 |
| ·诊断标准 | 第82页 |
| ·随访 | 第82-83页 |
| ·主要试剂及配制 | 第83-85页 |
| ·试剂 | 第83-84页 |
| ·试剂的配制 | 第84-85页 |
| ·仪器及用具处理 | 第85-86页 |
| ·仪器 | 第85-86页 |
| ·用具处理 | 第86页 |
| ·引物的设计 | 第86-87页 |
| ·方法 | 第87-91页 |
| ·组织总RNA 提取 | 第87-88页 |
| ·cDNA 合成 | 第88-89页 |
| ·半定量PCR | 第89-91页 |
| ·统计学方法 | 第91页 |
| 2 结果 | 第91-104页 |
| ·卵巢恶性肿瘤生存率 | 第91-92页 |
| ·MMP-9 与TIMP-1MRNA 的表达 | 第92-96页 |
| ·PT-PCR 扩增结果 | 第92-93页 |
| ·在卵巢恶性、良性肿瘤及正常卵巢组织中的表达 | 第93-94页 |
| ·在卵巢恶性肿瘤中的表达与临床病理特征的关系 | 第94-95页 |
| ·在卵巢恶性肿瘤组织中的表达与患者预后的关系 | 第95-96页 |
| ·MMP-2 与TIMP-2 MRNA 的表达 | 第96-99页 |
| ·PT-PCR 扩增结果 | 第96-97页 |
| ·在卵巢恶性、良性肿瘤及正常卵巢组织中的表达 | 第97-98页 |
| ·在卵巢恶性肿瘤中的表达与临床病理特征的关系 | 第98页 |
| ·在卵巢恶性肿瘤组织中的表达与患者预后的关系 | 第98-99页 |
| ·MMP-7 与TIMP-3 MRNA 的表达 | 第99-103页 |
| ·PT-PCR 扩增结果 | 第99-100页 |
| ·在卵巢恶性肿瘤、良性肿瘤及正常卵巢组织中的表达 | 第100-101页 |
| ·在卵巢恶性肿瘤组织中的表达与临床病理特征的关系 | 第101页 |
| ·在卵巢恶性肿瘤组织的表达与预后的关系 | 第101-103页 |
| ·COX比例风险模型预后分析 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-108页 |
| ·MMPS、TIMPS 在肿瘤中的作用及关系 | 第104页 |
| ·MMP-9、TIMP-1 MRNA 的表达与卵巢肿瘤的关系 | 第104-105页 |
| ·MMP-2、TIMP-2 MRNA 的表达与卵巢肿瘤的关系 | 第105-106页 |
| ·MMP-7、TIMP-3 MRNA 的表达与卵巢肿瘤的关系 | 第106-108页 |
| 第三章 TIMP-1 真核表达质粒的构建及在卵巢肿瘤组织中突变的检测 | 第108-129页 |
| 1 材料与方法 | 第108-120页 |
| ·材料 | 第108-110页 |
| ·标本 | 第108页 |
| ·质粒与菌株 | 第108页 |
| ·试剂 | 第108-110页 |
| ·仪器 | 第110页 |
| ·原理 | 第110-114页 |
| ·实验方法 | 第114-120页 |
| ·引物设计与合成 | 第114-115页 |
| ·TIMP-1 全长cDNA 的PCR 扩增 | 第115页 |
| ·PCR 产物的纯化与回收 | 第115-116页 |
| ·大肠杆菌感受态细菌的制备 | 第116页 |
| ·TOPO 克隆反应 | 第116页 |
| ·质粒DNA 转化感受态大肠杆菌TOP10 | 第116-117页 |
| ·挑选氨苄抗性克隆 | 第117页 |
| ·质粒DNA 的快速提取 | 第117页 |
| ·PCR 法鉴定 | 第117-118页 |
| ·重组质粒的测序 | 第118页 |
| ·序列分析 | 第118页 |
| ·SSCP 的PCR 扩增 | 第118-119页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第119页 |
| ·银染色 | 第119-120页 |
| ·回收目标条带进行PCR 反应及产物测序 | 第120页 |
| ·统计学方法 | 第120页 |
| 2 结果 | 第120-126页 |
| ·TIMP1 CDNA 的PCR 结果 | 第120页 |
| ·质粒电泳结果 | 第120页 |
| ·PCR 法重组质粒的鉴定结果 | 第120-121页 |
| ·TIMP-1 全序列测定结果及BLAST 分析 | 第121-124页 |
| ·PCR 结果 | 第124页 |
| ·SSCP 结果 | 第124-125页 |
| ·回收条带的PCR 测序结果 | 第125-126页 |
| 3 讨论 | 第126-129页 |
| 第四章 MMP-9 反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生物学行为的影响 | 第129-156页 |
| 1 材料与方法 | 第129-142页 |
| ·主要材料和试剂 | 第129-130页 |
| ·试剂的配制 | 第130-132页 |
| ·仪器 | 第132页 |
| ·寡核苷酸的设计与合成 | 第132-133页 |
| ·引物的设计与合成 | 第133页 |
| ·卵巢癌细胞MMP-9、MMP-2 及TIMP-1 表达的检测 | 第133-136页 |
| ·细胞培养 | 第133-134页 |
| ·纤粘连蛋白诱导卵巢癌细胞MMP-9、MMP-2 的mRNA 及蛋白的表达 | 第134页 |
| ·Western Blot 检测蛋白的表达 | 第134-136页 |
| ·MMP-9 反义寡核苷酸转染卵巢癌细胞 | 第136-137页 |
| ·实验分组 | 第136页 |
| ·Lipofectimine 介导的寡核苷酸转染(以24 孔板为例) | 第136-137页 |
| ·绿色荧光蛋白载体(PEGFP-N1)的转染 | 第137页 |
| ·姬姆萨染色法 | 第137页 |
| ·MMP-9 的MRNA、蛋白及酶活性的检测 | 第137-139页 |
| ·RT-PCR 检测MMP-9 mRNA 的表达 | 第137页 |
| ·Western Blot 检测MMP-9 蛋白的表达 | 第137页 |
| ·明胶酶谱法(Zymography)进行酶活性的检测 | 第137-139页 |
| ·细胞生物学特性观察 | 第139页 |
| ·细胞生长曲线测定法(活细胞计数法) | 第139页 |
| ·细胞集落形成测定 | 第139页 |
| ·流式细胞仪检测细胞生长周期的变化 | 第139页 |
| ·细胞侵袭粘附能力的测定 | 第139-142页 |
| ·细胞体外侵袭能力测定(Matrigel Invasion Assay) | 第139-141页 |
| ·细胞体外迁移能力测定(Transwell Migration Assays) | 第141页 |
| ·细胞体外黏附能力测定(Cell Adhersion Assay) | 第141-142页 |
| ·统计学方法 | 第142页 |
| 2 结果 | 第142-152页 |
| ·卵巢癌细胞株MMP-9、MMP-2、TIMP-1 MRNA 的表达 | 第142页 |
| ·纤粘连蛋白诱导后卵巢癌细胞MMP-9、MMP-2 的MRNA 及蛋白的表达 | 第142-143页 |
| ·LIPOFECTIMINE 介导的转染效率的观察 | 第143页 |
| ·转染对细胞MMP-9 MRNA、蛋白及酶活性表达的影响 | 第143-146页 |
| ·MMP-9 mRNA 的表达 | 第143-144页 |
| ·细胞MMP-9 蛋白表达 | 第144-145页 |
| ·MMP-9 明胶酶活性的表达 | 第145-146页 |
| ·转染对卵巢癌细胞生物学特征的影响 | 第146-149页 |
| ·细胞形态的影响 | 第146页 |
| ·细胞生长曲线的影响 | 第146-147页 |
| ·克隆形成率的影响 | 第147-149页 |
| ·MMP-9 反义寡核苷酸对卵巢癌细胞侵袭粘附能力的影响 | 第149-152页 |
| ·细胞体外侵袭能力的检测 | 第149-150页 |
| ·细胞体外迁移能力的测定 | 第150-152页 |
| 3 讨论 | 第152-156页 |
| 第五章 RNA 干扰抑制卵巢癌细胞MMP-9 基因表达的研究 | 第156-174页 |
| 1 材料与方法 | 第156-164页 |
| ·主要材料和试剂 | 第156-157页 |
| ·RNAI 实验 | 第157-163页 |
| ·实验原理 | 第157-159页 |
| ·siRNA 的选择及引物设计 | 第159-162页 |
| ·基因序列的选择 | 第159页 |
| ·下游引物序列 | 第159-160页 |
| ·下游引物设计 | 第160-162页 |
| ·实验分组 | 第162页 |
| ·dsRNA 合成及转染 | 第162-163页 |
| ·绿色荧光蛋白载体(PEGFP-N1)的转染 | 第163页 |
| ·RT-PCR | 第163页 |
| ·WESTERN BLOT | 第163页 |
| ·细胞生长曲线测定法(MTT 比色法) | 第163-164页 |
| ·.细胞体外侵袭能力测定(MATRIGEL INVASION ASSAY) | 第164页 |
| ·细胞体外粘附能力测定(CELL ADHERSION ASSAY) | 第164页 |
| ·统计学方法 | 第164页 |
| 2 结果 | 第164-171页 |
| ·DNA 的扩增与纯化 | 第164-165页 |
| ·转染效率 | 第165页 |
| ·SIRNA 对卵巢癌细胞HO-8910PM MMP-9 MRNA、蛋白表达的影响 | 第165-168页 |
| ·MMP-9 mRNA 的表达 | 第165-166页 |
| ·MMP-9 蛋白的表达 | 第166-168页 |
| ·细胞生长曲线的变化 | 第168页 |
| ·SIRNA 抑制MMP-9 基因表达对卵巢癌细胞侵袭粘附能力的影响 | 第168-171页 |
| ·细胞体外侵袭能力的检测 | 第168-169页 |
| ·细胞体外粘附能力测定 | 第169-171页 |
| 3 讨论 | 第171-174页 |
| 小结 | 第174-175页 |
| 参考文献 | 第175-203页 |
| 附彩图 | 第203-204页 |
| 学习期间发表论文 | 第204页 |
