| 摘要 | 第1-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 前言 | 第10-27页 |
| ·简介 | 第10-11页 |
| ·根瘤菌的分类 | 第11-12页 |
| ·结瘤基因的组织和分类 | 第12-16页 |
| ·结瘤基因的分类 | 第13-14页 |
| ·结瘤基因的功能及其与nod box和类黄酮分子的相互作用 | 第14页 |
| ·nod box的结构特征 | 第14-15页 |
| ·NodD与诱导物相互作用的细胞定位 | 第15页 |
| ·NodD与诱导物是否发生直接相互作用 | 第15-16页 |
| ·诱导物对于NodD与nod box结合的影响 | 第16页 |
| ·结瘤基因的调控 | 第16-21页 |
| ·R. leg. 8401(pRL1JI)中结瘤基因的调控 | 第16-18页 |
| ·B. japonicum中结瘤基因的调控 | 第18-20页 |
| ·two-component调节 | 第18-19页 |
| ·负调控系统 | 第19-20页 |
| ·Rhizobium sp. NGR234中结瘤基因的调控 | 第20-21页 |
| ·结瘤基因表达的精细调控 | 第21-25页 |
| ·结瘤基因的负反馈调控 | 第21页 |
| ·结瘤基因的quorum调控 | 第21-25页 |
| ·B. japonicum中的quorum调节 | 第22-23页 |
| ·R. leguminosarum bv. Viciae中的quorum感知调节体系 | 第23-24页 |
| ·S. meliloti中的quorum感知调控 | 第24-25页 |
| ·前景与展望 | 第25页 |
| ·关于本研究 | 第25-27页 |
| 2.材料和方法 | 第27-49页 |
| ·菌株与质粒 | 第27-28页 |
| ·引物、酶和主要生化试剂 | 第28-30页 |
| ·引物 | 第28-29页 |
| ·酶和主要生化试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·基本的实验技术和方法 | 第30-33页 |
| ·细菌培养 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA的抽提 | 第31-32页 |
| ·感受态细胞制备和重组质粒的转化 | 第32-33页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·重组质粒的转化 | 第32-33页 |
| ·从低熔点琼脂糖凝胶中回收DNA | 第33页 |
| ·根瘤菌总DNA的抽提 | 第33-35页 |
| ·根瘤菌总DNA的小量抽提 | 第33-34页 |
| ·根瘤菌总DNA的大量抽提 | 第34-35页 |
| ·Southern杂交 | 第35-37页 |
| ·切口平移法标记hxy基因探针 | 第35-36页 |
| ·将DNA转移到尼龙膜 | 第36-37页 |
| ·放射性标记的探针与固定于尼龙膜上的DNA进行杂交 | 第37页 |
| ·豌豆根瘤菌基因组hxy基因的克隆及序列分析 | 第37-40页 |
| ·豌豆根瘤菌基因组DNA Sal Ⅰ酶切片段接头与接头引物的设计 | 第37-38页 |
| ·豌豆根瘤菌基因组hxy基因特异引物设计 | 第38页 |
| ·GenomeWalking法克隆hxy基因 | 第38-40页 |
| ·DNA序列分析及同源性比较 | 第40页 |
| ·根瘤菌RNA的抽提和RT-PCR反应 | 第40-43页 |
| ·RNA专用仪器的预处理 | 第40页 |
| ·水饱和酚的配制 | 第40页 |
| ·根瘤菌RNA的抽提 | 第40-41页 |
| ·RNA的甲醛变性电泳 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR反应 | 第42-43页 |
| ·双亲杂交 | 第43-44页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy突变株的构建 | 第44-46页 |
| ·含插入了卡那霉素抗性片段的hxy基因的重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·含卡那霉素抗性基因的DNA片段的制备 | 第44页 |
| ·含插入了卡那霉素抗性片段的hxy基因的重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy突变株的构建 | 第45页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy基因卡那霉素抗性插入突变菌株的验证 | 第45-46页 |
| ·PCR方法验证 | 第45-46页 |
| ·Southern杂交方法验证 | 第46页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy突变株中结瘤基因表达的测定 | 第46-49页 |
| ·结瘤基因表达报告质粒的构建 | 第46页 |
| ·根瘤菌电转化感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·利用电转化的方法将报告质粒转移到根瘤菌野生型菌株和hxy突变株中 | 第47页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性的测定 | 第47-49页 |
| ·试剂配制 | 第47页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性测定 | 第47-49页 |
| 3.实验结果 | 第49-63页 |
| ·豌豆根瘤菌基因组中只含单一种类和单一拷贝的hxy基因 | 第49-50页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy基因的克隆 | 第50-52页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy基因的测序及序列分析 | 第52-55页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy基因序列的同源性比较 | 第55-56页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy基因RT-PCR结果 | 第56-57页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy突变株的构建 | 第57-59页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy突变株mutDw6的鉴定 | 第59-61页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy基因突变对结瘤基因表达的影响 | 第61-63页 |
| 4.讨论 | 第63-66页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy基因很可能是一个新基因 | 第63页 |
| ·在转录水平上hxy基因不影响结瘤基因的表达 | 第63-64页 |
| ·豌豆根瘤菌hxy基因的功能进一步研究 | 第64-66页 |
| ·结瘤实验 | 第64-65页 |
| ·引物延伸实验 | 第65页 |
| ·构建hxy基因表达质粒 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
