| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-24页 |
| 实验材料 | 第24-30页 |
| 实验方法 | 第30-35页 |
| 1.大肠杆菌质粒DNA小量提取 | 第30页 |
| 2.链霉菌质粒DNA的提取 | 第30页 |
| 3.链霉菌总DNA的提取 | 第30-31页 |
| 4.重组质粒的快速鉴定 | 第31页 |
| 5.大肠杆菌DH-5α感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 6.质粒DNA转化大肠杆菌 | 第31页 |
| 7.DNA酶切和连接 | 第31-32页 |
| 8.DNA电泳和片断回收 | 第32页 |
| 9.原生质体的制备、质粒DNA转化 | 第32页 |
| 10.电转化 | 第32-33页 |
| 11.接合转移实验 | 第33页 |
| 12.超声破碎 | 第33-34页 |
| 13.CO结合差光谱法测定菌体中的VHB | 第34页 |
| 14.PCR反应 | 第34-35页 |
| 结果与讨论 | 第35-62页 |
| 第一部分 糖多孢红霉菌基因转移系统的建立 | 第35-48页 |
| 1.结合转移系统 | 第35-36页 |
| ·糖多孢红霉菌的抗药性考察 | 第35-36页 |
| ·预萌发温度及预萌发时间的考察 | 第36页 |
| ·固体培养基的考察 | 第36页 |
| ·质粒的考察 | 第36页 |
| 2.电激转化系统 | 第36-37页 |
| 3.原生质体转化 | 第37-47页 |
| ·质粒的选择 | 第37页 |
| ·PEG介导质粒转化糖多孢红霉菌原生质体的初步尝试 | 第37-38页 |
| ·糖多孢红霉菌原生质体制备和再生的考察及转化系统的建立 | 第38-47页 |
| 4.讨论 | 第47-48页 |
| 第二部分 表达用质粒pSPU227的构建 | 第48-57页 |
| 1.质粒pSPU223的构建 | 第48-51页 |
| ·PCR法扩增PmerR启动子 | 第48-49页 |
| ·PmerR基因的克隆和测序 | 第49-50页 |
| ·质粒pSPU223的构建 | 第50-51页 |
| 2.质粒pSPU226的构建 | 第51-52页 |
| 3.质粒pSPU227的构建 | 第52页 |
| 4.质粒pSPU227酶切验证 | 第52页 |
| 5.质粒pSPU237的构建 | 第52-55页 |
| 6.讨论 | 第55-57页 |
| 第三部分 质粒pSPU227在糖多孢红霉菌中的应用 | 第57-62页 |
| 1.质粒pSPU238的构建 | 第57-60页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因vhb基因的扩增 | 第57-59页 |
| ·质粒pSPU238的构建 | 第59-60页 |
| 2.vhb基因的表达及其验证 | 第60-61页 |
| 3.讨论 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69页 |
