人扭转蛋白A的基因克隆表达及蛋白质纯化
| 0 前言 | 第1-17页 |
| 1 材料和方法 | 第17-31页 |
| ·实验材料 | 第17-20页 |
| ·实验器材 | 第17页 |
| ·工具酶和各种试剂 | 第17页 |
| ·载体和感受态细胞 | 第17页 |
| ·层析介质和设备 | 第17页 |
| ·有关样品 | 第17-20页 |
| ·实验方法 | 第20-31页 |
| ·基因背景 | 第20-22页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第22页 |
| ·PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·犷增 | 第22-23页 |
| ·DNA片段的回收 | 第23页 |
| ·克隆载体的构建与鉴定 | 第23-25页 |
| ·人DYT1基因的克隆 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第24-25页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第25页 |
| ·表达载体的构建 | 第25页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第25页 |
| ·表达 | 第25-26页 |
| ·试表达 | 第25页 |
| ·表达 | 第25-26页 |
| ·纯化 | 第26-29页 |
| ·包含体的制备 | 第26页 |
| ·复性 | 第26-27页 |
| ·亲和层析 | 第27-29页 |
| ·蛋白质生物学信息分析 | 第29-31页 |
| ·跨膜分析 | 第29页 |
| ·蛋白质基本理化特性分析 | 第29-31页 |
| 2 结果 | 第31-42页 |
| ·PCR扩增 | 第31页 |
| ·PCR产物克隆及克隆质粒鉴定 | 第31-33页 |
| ·表达载体的构建 | 第33-35页 |
| ·DYT1—pET28a表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·DYT1—pGEX-6P-1表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·表达 | 第35-36页 |
| ·DYT1在pET28a中的表达 | 第35页 |
| ·DYT1在pGEX-6P-1中的表达 | 第35-36页 |
| ·纯化 | 第36-38页 |
| ·包含体的制备 | 第36-37页 |
| ·复性 | 第37页 |
| ·亲和层析 | 第37页 |
| ·凝胶过滤 | 第37-38页 |
| ·生物信息学分析 | 第38-42页 |
| ·跨膜分析 | 第38-39页 |
| ·基本理化特性 | 第39-42页 |
| 3 讨论 | 第42-46页 |
| ·基因克隆表达技术 | 第42-43页 |
| ·DYT1在原核系统中的表达 | 第43-44页 |
| ·DYT1研究状况 | 第44-46页 |
| 4 小结 | 第46-47页 |
| 5 附录 | 第47-52页 |
| 附录一：实验试剂 | 第47-50页 |
| 附录二：DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第50页 |
| 附录三：质粒DNA的提取 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
