人乙醛脱氢酶2基因的克隆及表达
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 论文综述部分 | 第6-33页 |
| 人类乙醇脱氢酶、乙醛脱氢酶的研究进展 | 第6-33页 |
| 前言 | 第7页 |
| 1.乙醇代谢途径 | 第7-11页 |
| ·乙醇的消除反应 | 第8-9页 |
| ·乙醇在胃肠的吸收及初级代谢 | 第9-10页 |
| ·肝脏的乙醇代谢及其调控 | 第10-11页 |
| 2.乙醇脱氢酶的基因多态性 | 第11-13页 |
| ·adh2的基因多态性 | 第12页 |
| ·adh3的基因多态性 | 第12页 |
| ·adh等位基因频率在不同种族人群中的差异 | 第12-13页 |
| 3.乙醛脱氢酶的基因多态性 | 第13-16页 |
| ·aldh2基因的多态性 | 第13-14页 |
| ·aldh2基因多态性与脸红反应 | 第14页 |
| ·aldh2~*2是显性遗传 | 第14-15页 |
| ·中国人群aldh2基因多态性的研究 | 第15-16页 |
| 4.人肝乙醛脱氢酶的立体结构 | 第16-21页 |
| ·与其他来源ALDH的结构区别 | 第17-18页 |
| ·N端非保守序列 | 第18页 |
| ·蛋白表面非活性部位氨基酸的替换 | 第18-21页 |
| 5.人乙醛脱氢酶的动力学 | 第21-23页 |
| ·与其他物种ALDH动力学特征的比较 | 第21-22页 |
| ·NAD~+结合位点 | 第22-23页 |
| ·戒酒硫对ALDH的抑制作用 | 第23页 |
| 6.adh、aldh基因多态性与疾病的关系 | 第23-27页 |
| ·酒精性肝病 | 第24-25页 |
| ·上消化道癌症 | 第25-26页 |
| ·肝癌 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-33页 |
| 论文实验部分 | 第33-68页 |
| 人乙醛脱氢酶2基因的克隆及表达 | 第33-68页 |
| 1.实验材料和仪器 | 第36-41页 |
| ·菌种 | 第36页 |
| ·质粒 | 第36页 |
| ·酶 | 第36页 |
| ·各种试剂盒 | 第36-37页 |
| ·常用溶液与缓冲液 | 第37-38页 |
| ·其他主要试剂和商品来源 | 第38-39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·电泳胶的制备 | 第39-40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| 2.实验方法： | 第41-51页 |
| ·aldh2基因的扩增及回收 | 第41-43页 |
| ·克隆质粒pUCm-aldh2的构建及鉴定 | 第43-45页 |
| ·表达质粒pET22b-aldh2的构建及鉴定 | 第45-48页 |
| ·人ALDH2的原核表达系统的构建及优化 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的活性测定 | 第49-51页 |
| 3.实验结果 | 第51-63页 |
| ·aldh2基因的克隆 | 第51页 |
| ·阳性克隆的PCR筛选及酶切鉴定 | 第51-53页 |
| ·aldh2基因的序列分析 | 第53-54页 |
| ·质粒pET22b-aldh2的构建 | 第54-57页 |
| ·重组ALDH-2的诱导表达 | 第57-58页 |
| ·表达条件的优化 | 第58-59页 |
| ·包涵体的提取与纯化 | 第59-62页 |
| ·ALDH-2蛋白的活性检测 | 第62-63页 |
| 4.讨论 | 第63-65页 |
| ·降落PCR的设计方案 | 第63-64页 |
| ·PCR产物的酶切 | 第64页 |
| ·复性条件的摸索 | 第64-65页 |
| ·与ADH的耦联 | 第65页 |
| 总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-68页 |
| 附录一 | 第68-69页 |
| 附录二 | 第69-70页 |
| 附录三 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
