| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| ·干扰素概述 | 第11-16页 |
| ·干扰素发现、命名和分类 | 第11-12页 |
| ·干扰素-γ及其结构特征 | 第12页 |
| ·重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)的氨基酸序列及三维结构 | 第12-14页 |
| ·干扰素-γ的生物学活性 | 第14-16页 |
| ·干扰素-γ的临床应用 | 第16页 |
| ·重组人干扰素-γ的折叠复性 | 第16-22页 |
| ·包涵体的分离、洗涤和溶解 | 第16-17页 |
| ·包涵体的复性机理与方法 | 第17-21页 |
| ·稀释或透析复性 | 第18页 |
| ·液相层析复性 | 第18-19页 |
| ·小分子添加剂促进的复性 | 第19-20页 |
| ·分子伴侣和折叠酶促进的复性 | 第20页 |
| ·人工分子伴侣促进的复性 | 第20-21页 |
| ·重组人干扰素-γ复性过程的检测方法 | 第21-22页 |
| ·小分子伴侣协助重组蛋白质的体外折叠复性 | 第22-26页 |
| ·本文研究思路 | 第26-27页 |
| 第二章 重组人干扰素-γ的体外活性检测 | 第27-33页 |
| ·材料与仪器 | 第27-28页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·实验仪器 | 第27-28页 |
| ·测定细胞与攻击病毒 | 第28页 |
| ·标准品 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-30页 |
| ·Wish细胞的培养 | 第28页 |
| ·VSV的扩增与保存 | 第28-29页 |
| ·VSV效价的滴定 | 第29页 |
| ·微量CPE测定法 | 第29页 |
| ·结晶紫染色测定法 | 第29-30页 |
| ·干扰素效价的计算方法 | 第30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-32页 |
| ·结晶紫染液的用量及作用时间 | 第30页 |
| ·结晶紫染料的提取时间 | 第30-31页 |
| ·边缘效应 | 第31页 |
| ·孔板效应 | 第31页 |
| ·超滤膜对蛋白的吸附 | 第31-32页 |
| ·结晶紫染色法检测复性的rhIFN-γ活性 | 第32页 |
| ·本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 重组小分子伴侣的小型间歇罐发酵 | 第33-43页 |
| ·材料与仪器 | 第33-34页 |
| ·质粒与宿主菌 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33-34页 |
| ·缓冲液 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-39页 |
| ·小分子伴侣sht GroEL 191-345小型间歇罐发酵 | 第34-35页 |
| ·菌种活化 | 第34-35页 |
| ·种子培养 | 第35页 |
| ·小分子伴侣sht GroEL 191-345发酵 | 第35页 |
| ·小分子伴侣sht GroEL 191-345的分离纯化 | 第35-36页 |
| ·细胞收集和破碎 | 第35页 |
| ·亲和层析 | 第35页 |
| ·产品脱盐浓缩 | 第35-36页 |
| ·分析方法 | 第36-39页 |
| ·光密度法(OD600) | 第36页 |
| ·3，5-二硝基水杨酸(DNS)法 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第37页 |
| ·Folin-酚(Lowry)法 | 第37-39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-42页 |
| ·小分子伴侣sht GroEL 191-345在小型间歇罐中的发酵 | 第39-40页 |
| ·小分子伴侣sht GroEL 191-345的分离纯化 | 第40-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 游离小分子伴侣协助重组人干扰素-γ的复性 | 第43-50页 |
| ·材料与仪器 | 第43-44页 |
| ·重组人干扰素-γ和小分子伴侣sht GroEL191-345 | 第43页 |
| ·缓冲液 | 第43-44页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·实验仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·rhIFN-γ包涵体的制备与变性溶解 | 第44页 |
| ·游离小分子伴侣协助rhIFN-γ的复性 | 第44-45页 |
| ·温度和时间对rhIFN-γ复性的影响 | 第44页 |
| ·初始rhIFN-γ蛋白浓度、缓冲液pH、脲浓度及sht GroEL191-345与rhIFN-γ摩尔比对rhIFN-γ复性的影响 | 第44-45页 |
| ·复性效果表征 | 第45-46页 |
| ·rhIFN-γ的蛋白收率 | 第45页 |
| ·rhIFN-γ生物活性的测定 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-49页 |
| ·温度与时间 | 第46-47页 |
| ·游离小分子伴侣协助rhIFN-γ复性的正交试验 | 第47-48页 |
| ·小分子伴侣对rhIFN-γ复性效率的影响 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 第五章 固定化小分子伴侣复性重组人干扰素-γ | 第50-60页 |
| ·材料与仪器 | 第50页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·缓冲液 | 第50页 |
| ·实验仪器 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·rhIFN-γ包涵体的制备与变性溶解 | 第50-51页 |
| ·小分子伴侣sht GroEL191-345的固定化 | 第51页 |
| ·固定化小分子伴侣复性干扰素-γ | 第51-52页 |
| ·批式复性 | 第51页 |
| ·固定化小分子伴侣sht GroEL191-345层析柱复性 | 第51-52页 |
| ·透析方法 | 第52页 |
| ·复性效果表征 | 第52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-59页 |
| ·批式复性 | 第52-53页 |
| ·固定化小分子伴侣层析柱复性rhIFN-γ | 第53-58页 |
| ·盐浓度对rhIFN-γ复性的影响 | 第53-55页 |
| ·脲浓度对rhIFN-γ复性的影响 | 第55-56页 |
| ·洗脱速度对rhIFN-γ复性的影响 | 第56-57页 |
| ·上样量对rhIFN-γ复性的影响 | 第57-58页 |
| ·小分子伴侣sht GroEL191-345的重复利用 | 第58-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第六章 人工分子伴侣协助重组干扰素-γ复性的初步研究 | 第60-65页 |
| ·材料与仪器 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| ·包涵体的制备与变性溶解 | 第60页 |
| ·人工分子伴侣协助rhIFN-γ的复性 | 第60-61页 |
| ·CTAB浓度、β-CD加入时间及β-CD与CTAB的摩尔比对复性的影响 | 第60-61页 |
| ·脲浓度对复性的影响 | 第61页 |
| ·分析方法 | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-64页 |
| ·人工分子伴侣协助rhIFN-γ复性的正交试验 | 第61-62页 |
| ·不同脲浓度下人工分子伴侣协助rhIFN-γ复性效果 | 第62-63页 |
| ·不同rhIFN-γ初始浓度下人工分子伴侣协助rhIFN-γ复性效果 | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 结论与建议 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
