符号说明 | 第1-6页 |
中文摘要 | 第6-11页 |
英文摘要 | 第11-17页 |
前言 | 第17-72页 |
第一部分: 结核杆菌HSP70真核表达质粒的构建和鉴定 | 第21-30页 |
实验材料 | 第21-22页 |
实验方法 | 第22-26页 |
实验结果 | 第26-30页 |
第二部分: HBsAg及其与结核杆菌HSP70融合表达质粒的构建和鉴定 | 第30-48页 |
实验材料 | 第30-31页 |
实验方法 | 第31-39页 |
实验结果 | 第39-48页 |
第三部分: HBsAg及其与结核杆菌HSP70融合表达质粒在真核细胞中的表达 | 第48-62页 |
实验材料 | 第48-49页 |
实验方法 | 第49-56页 |
1. 质粒的大量提取 | 第49-50页 |
2. 质粒转染HepG2细胞(或COS-7细胞) | 第50-51页 |
3. HapG2细胞总RNA的提取 | 第51-52页 |
4. RT-PCR检测目的基因在转录水平的表达 | 第52-54页 |
5. 免疫细胞化学方法检测HBsAg的表达 | 第54-55页 |
6. ELISA检测HBsAg的表达 | 第55-56页 |
实验结果 | 第56-62页 |
1. 目的基因在转录水平表达的RT-PCR检测结果 | 第56-57页 |
2. 免疫细胞化学检测结果 | 第57-60页 |
3. 重组质粒在HepG2细胞和COS-7细胞中的表达 | 第60-62页 |
第四部分: HBsAg及其与结核杆菌HSP70融合表达质粒DNA免疫小鼠诱导其产生特异性免疫应答 | 第62-72页 |
实验材料 | 第62页 |
实验方法 | 第62-65页 |
1. 质粒大量提取和定量 | 第63页 |
2. 质粒DNA免疫小鼠 | 第63页 |
3. 抗-HBs抗体检测方法 | 第63-64页 |
4. 免疫小鼠脾细胞的制备 | 第64页 |
5. 免疫小鼠脾细胞HBsAg特异性CTL的检测(LDH释放法) | 第64-65页 |
6. 免疫小鼠脾细胞IL-2、IFN-γ、IL-4分泌的检测 | 第65页 |
实验结果 | 第65-72页 |
1. 质粒纯度和含量测定结果 | 第65-66页 |
2. 免疫小鼠抗-HBs抗体反应检测结果 | 第66-68页 |
3. 质粒DNA免疫小鼠HBsAg特异性CTL活性 | 第68页 |
4. 质粒DNA免疫小鼠脾细胞体外诱导IL-2的分泌水平 | 第68-69页 |
5. 质粒DNA免疫小鼠脾细胞体外诱导IFN-γ的分泌水平 | 第69-71页 |
6. 质粒DNA免疫小鼠脾细胞体外诱导IL-4的分泌水平 | 第71-72页 |
讨论 | 第72-79页 |
参考文献 | 第79-84页 |
结论 | 第84-85页 |
本课题的创新点 | 第85-86页 |
文献综述1: 乙型肝炎核酸疫苗的研究进展 | 第86-96页 |
文献综述2: 分枝杆菌热休克蛋白的载体分子效应 | 第96-104页 |
致谢 | 第104-105页 |
攻读博士学位期间发表的学术论文及参加学术会议 | 第105页 |