致谢 | 第1-7页 |
缩写 | 第7-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
英文摘要 | 第10-13页 |
综述 | 第13-41页 |
第一部分 微生物菌种选育研究进展 | 第13-29页 |
1.1 特定化合物产生菌的筛选(微生物来源化合物的筛选)技术及策略 | 第14-21页 |
1.1.1 丰富培养和纯种分离 | 第14-16页 |
1.1.2 极端生态环境中筛选特定功能的微生物 | 第16页 |
1.1.3 用于菌种筛选的新靶位和模型 | 第16-18页 |
1.1.4 应用于新化合物筛选的微生物菌种筛选常用分析方法 | 第18-20页 |
1.1.5 根据系统分类学的知识进行菌种筛选 | 第20页 |
1.1.6 基于基因及分子技术的菌种筛选 | 第20-21页 |
1.2 微生物菌种改良的方法与研究进展 | 第21-29页 |
1.2.1 微生物突变育种 | 第21-23页 |
1.2.2 微生物代谢调节方式与基于生理代谢知识的菌种改良策略与方法 | 第23-25页 |
1.2.3 细胞技术以及基因工程技术在微生物菌种选育中的应用 | 第25-29页 |
第二部分 柔红霉素及阿霉素产生菌的研究进展 | 第29-37页 |
柔红霉素聚酮体代谢途径的研究 | 第29-30页 |
菌种选育 | 第30页 |
柔红霉素与阿霉素产生菌基因水平上的研究 | 第30-37页 |
参考文献 | 第37-41页 |
论文正文 | 第41-104页 |
第一部分 柔红霉素高产菌种选育 | 第41-71页 |
第一章 核糖体工程技术在柔红霉素高产菌种选育中的应用 | 第41-57页 |
一、 前言 | 第41-44页 |
二、 材料与方法 | 第44-49页 |
(一)、 试验菌种 | 第44页 |
(二)、 试剂与溶液 | 第44-45页 |
(三)、 培养基 | 第45页 |
(四)、方法 | 第45-49页 |
1、 孢子悬浮液的制备 | 第45-46页 |
2、 链霉素对SIPI1482的最小抑制浓度(MIC)的测定 | 第46页 |
3、 链霉素抗性自发突变株的获得 | 第46页 |
4、 卡那霉素抗性自发突变株的获得 | 第46页 |
5、 种子液的制备 | 第46页 |
6、 发酵培养 | 第46页 |
7、 发酵产物的抽提与含量测定 | 第46-47页 |
8、 紫外诱变处理~[8] | 第47页 |
9、 PCR反应条件及程序 | 第47-49页 |
三、 实验结果 | 第49-54页 |
四、 讨论 | 第54-56页 |
五、 参考文献 | 第56-57页 |
第二章 离子注入诱变育种在柔红霉素高产菌选育中的应用 | 第57-71页 |
一、 前言 | 第57-61页 |
1.1 低能离子注入与生物材料相互作用的基本原理 | 第57-59页 |
1.2 离子束注入诱变育种在微生物菌种选育中的应用 | 第59-61页 |
二、 试验材料和方法 | 第61-62页 |
2.1 菌种 | 第61页 |
2.2 培养基及其他材料 | 第61页 |
2.3 试验方法 | 第61-62页 |
三、 试验结果与讨论 | 第62-69页 |
四、 参考文献 | 第69-70页 |
第一部分小结 | 第70-71页 |
第二部分 柔红霉素生物转化研究 | 第71-103页 |
前言 | 第71-72页 |
第三章 耐柔红霉素的变铅青链霉菌突变株的选育 | 第72-81页 |
一、 材料与方法 | 第72-75页 |
(一)、 材料 | 第72-73页 |
1、 化学品和生化试剂 | 第72页 |
2、 菌种 | 第72页 |
3、 主要器材 | 第72页 |
4、 培养基与缓冲液 | 第72-73页 |
(二) 方法 | 第73-75页 |
1、 菌种的生长、维持和保藏 | 第73-74页 |
2、 TK-24菌株的诱变处理 | 第74页 |
3、 抗性突变株的师选 | 第74-75页 |
4、 抗性突变株的复证 | 第75页 |
二、 结果与讨论 | 第75-81页 |
(一) 结果 | 第75-79页 |
(二) 讨论 | 第79-81页 |
第四章 微生物转化法生产阿霉素基因工程菌的构建 | 第81-103页 |
一、 材料 | 第81-85页 |
(一) 化学品和生化试剂 | 第81页 |
(二) 菌种 | 第81-82页 |
(三) 质粒 | 第82页 |
(四) 培养基 | 第82-83页 |
(五) 缓冲液 | 第83-85页 |
二、 试验方法 | 第85-94页 |
(一) 菌种的培养,维持和保藏 | 第85页 |
(二) SIPI1482,S.C5,SIPI40141菌株染色体DNA分离纯化 | 第85页 |
(三) 质粒的分离 | 第85-86页 |
(四) 链霉菌原生质体的制备 | 第86-87页 |
(五) 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第87页 |
(六) 质粒转化 | 第87-88页 |
(七) 从电泳凝胶中回收DNA片段 | 第88页 |
(八) PCR反应的相关计算及其条件 | 第88-89页 |
(九) 链霉菌的培养发酵、产物的抽提方法 | 第89页 |
(十) DNA的酶切操作、连接 | 第89-90页 |
(十一) 带doxA基因系列重组质粒的构建 | 第90页 |
(十二) 基因工程重组菌对柔红霉素生物转化 | 第90页 |
(十三) 带pYG57质粒的N-18菌株与SIPI1482共发酵试验 | 第90-94页 |
三、 试验结果与讨论 | 第94-103页 |
1 PCR反应结果 | 第94-97页 |
2 带不同重组质粒工程菌对柔红霉素生物转化结果 | 第97-98页 |
3 pYG57/N-18菌株与SIPI1482菌株的共发酵试验 | 第98页 |
4 pYG57对SIPI1482M和SIPI1482菌株的转化、发酵及其稳定性 | 第98-103页 |
第二部分小结 | 第103-104页 |
第二部分参考文献 | 第104页 |