| 提要 | 第1-9页 |
| 前言 | 第9-17页 |
| 一、 概述 | 第9-10页 |
| 二、 FMDV 非结构蛋白特异性抗体消长规律 | 第10-13页 |
| 三、 口蹄疫检测方法的研究进展 | 第13-17页 |
| 材料和方法 | 第17-25页 |
| 1. 引物的设计 | 第17-18页 |
| 2. 主要试剂 | 第18-19页 |
| ·限制性内切酶及其它试剂 | 第18页 |
| ·质粒与菌株 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·血清样本及纯化介质 | 第19页 |
| 3. 主要方法 | 第19-25页 |
| ·目的基因片段的获得 | 第19页 |
| ·目的基因片段的TA克隆 | 第19-20页 |
| ·重组蛋白表达载体的构建 | 第20页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第20-21页 |
| ·重组蛋白编码基因的DNA测序 | 第21页 |
| ·Western blot鉴定 | 第21页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第21-23页 |
| ·包涵体洗涤及溶解 | 第22页 |
| ·亲和层析纯化重组蛋白 | 第22-23页 |
| ·准备镍层析柱 | 第22页 |
| ·重组蛋白吸附、洗涤和洗脱 | 第22-23页 |
| ·重组蛋白除盐 | 第23页 |
| ·重组蛋白定量 | 第23页 |
| ·间接ELISA检测 | 第23-25页 |
| 实验流程 | 第25-26页 |
| 实验结果 | 第26-36页 |
| 1. 3AB、3aB、3D 基因片段的获得 | 第26页 |
| 2. 重组质粒的构建 | 第26-27页 |
| ·重组pMD18T质粒的构建 | 第26-27页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第27页 |
| 3. 重组蛋白的诱导表达、鉴定及纯化 | 第27-31页 |
| ·3AB、3aB及3D蛋白的表达和鉴定 | 第28页 |
| ·3AB蛋白诱导条件的优化 | 第28-30页 |
| ·3AB蛋白最佳诱导时间的确定 | 第28-29页 |
| ·3AB蛋白最佳诱导温度和最佳抗生素浓度的确定 | 第29页 |
| ·3AB蛋白最佳诱导剂浓度和最佳诱导前菌体密度的确定 | 第29-30页 |
| ·3AB蛋白表达方式鉴定及纯化 | 第30-31页 |
| 4. 鉴别自然感染口蹄疫病毒与接种疫苗动物的间接ELISA方法的建立 | 第31-36页 |
| ·重组蛋白3AB特异性的ELISA检测 | 第31-32页 |
| ·牛血清口蹄疫非结构蛋白特异性抗体的检测 | 第32页 |
| ·间接ELISA各项反应条件的优化 | 第32-36页 |
| ·最适抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第32-33页 |
| ·最佳包被液的确定 | 第33页 |
| ·封闭液的优化 | 第33-34页 |
| ·样品稀释液的优化 | 第34页 |
| ·阳性判定标准的确定 | 第34-36页 |
| 图片及表格 | 第36-51页 |
| 讨论 | 第51-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 中文摘要 | 第62-65页 |
| ABSTRACT | 第65-69页 |
| 硕士期间的成果 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |