| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-51页 |
| 1 高盐对植物的影响 | 第17-19页 |
| ·渗透胁迫 | 第17-18页 |
| ·离子毒害 | 第18-19页 |
| 2 植物耐盐机理 | 第19-31页 |
| ·渗透调节 | 第19-22页 |
| ·调节矿质元素的吸收和分布 | 第19-20页 |
| ·合成积累有机溶质 | 第20-21页 |
| ·LEA 蛋白的调节作用 | 第21-22页 |
| ·活性氧清除 | 第22-27页 |
| ·植物中活性氧的种类及性质 | 第22页 |
| ·植物体内活性氧的生成 | 第22-23页 |
| ·盐胁迫下植物活性氧的清除 | 第23-27页 |
| ·酶促保护系统 | 第23-27页 |
| ·非酶促保护系统 | 第27页 |
| ·转录因子与植物的抗逆性 | 第27-31页 |
| ·转录因子的调控机制 | 第27-31页 |
| ·组成型转录因子 | 第28页 |
| ·诱导型转录因子 | 第28页 |
| ·转录因子与植物抗逆性 | 第28-31页 |
| ·转录因子YAP1 基因 | 第31页 |
| 3. 耐盐模式植物盐芥(Thellungiella halophila ) | 第31-35页 |
| 4. 植物功能基因组学研究方法 | 第35-38页 |
| 5 激活标签法建立突变体库 | 第38-50页 |
| ·激活标签法概述 | 第38-39页 |
| ·激活标签法中的载体 | 第39-40页 |
| ·T-DNA 的结构与功能 | 第39-40页 |
| ·激活标签的质粒载体 | 第40页 |
| ·获得T-DNA 插入位点侧翼序列的方法 | 第40-46页 |
| ·质粒拯救法 | 第41页 |
| ·反向PCR | 第41-42页 |
| ·TAIL PCR | 第42-46页 |
| ·TAIL-PCR 的基本原理 | 第42-43页 |
| ·TAIL-PCR 的引物设计及反应条件 | 第43-44页 |
| ·TAIL-PCR 的产物分析 | 第44页 |
| ·TAIL-PCR 的优点以及技术难点 | 第44-46页 |
| ·激活标签法在植物功能基因组学研究中的应用研究进展 | 第46-50页 |
| ·标记基因的克隆 | 第48-49页 |
| ·标记基因的功能鉴定 | 第49-50页 |
| 6. 建立盐芥激活标签突变体库的意义 | 第50-51页 |
| 第二部分 实验论文 | 第51-106页 |
| 第一章 盐芥激活标签突变体库的建立 | 第51-79页 |
| 1 实验材料 | 第51-52页 |
| ·植物材料 | 第51页 |
| ·菌种及质粒 | 第51页 |
| ·酶及化学试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器设备 | 第51-52页 |
| ·培养基 | 第52页 |
| 2. 实验方法 | 第52-61页 |
| ·花浸染法转化盐芥 | 第52-54页 |
| ·盐芥的种植 | 第52-53页 |
| ·转化用农杆菌的准备 | 第53-54页 |
| ·四个串联增强子的PCR 检测 | 第53-54页 |
| ·转化用农杆菌菌液的制备 | 第54页 |
| ·Floral dip 法转化盐芥 | 第54页 |
| ·Basta 抗性苗的筛选 | 第54页 |
| ·盐芥DNA 的提取 | 第54-56页 |
| ·Basta 抗性苗的PCR 检测 | 第56-57页 |
| ·TAIL-PCR 法扩增侧翼序列 | 第57-58页 |
| ·引物设计 | 第57页 |
| ·TAIL-PCR 反应体系 | 第57-58页 |
| ·TAIL-PCR 反应程序 | 第58页 |
| ·GeneClean 方法从琼脂糖凝胶上回收DNA 片段 | 第58-59页 |
| ·PCR 产物与pMD18-T 载体的连接 | 第59页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备和转化 | 第59-60页 |
| ·质粒的提取及酶切验证 | 第60页 |
| ·T-DNA 插入侧翼序列的测序及序列分析 | 第60页 |
| ·激活标记突变体种子的收获与保存 | 第60-61页 |
| 3 实验结果及分析 | 第61-75页 |
| ·激活标记载体四个串联增强子的PCR 检测 | 第61-62页 |
| ·浸染用盐芥的种植 | 第62页 |
| ·Basta 抗性苗的获得 | 第62-63页 |
| ·Basta 抗性苗DNA 的提取 | 第63-64页 |
| ·Basta 抗性苗的PCR 检测结果 | 第64-65页 |
| ·侧翼序列的获得和分析 | 第65-66页 |
| ·TAIL-PCR 扩增产物的酶切验证 | 第66页 |
| ·盐芥激活标记侧翼序列的测序及序列分析 | 第66-75页 |
| 4 讨论: | 第75-79页 |
| ·关于盐芥的栽培 | 第75页 |
| ·关于盐芥的转化效率问题 | 第75-76页 |
| ·关于用除草剂Basta 对转基因种子的筛选 | 第76页 |
| ·突变体侧翼序列的获得 | 第76-77页 |
| ·突变体库的完善 | 第77-79页 |
| 第二章 YAP1 基因在拟南芥中的过量表达 | 第79-106页 |
| 1 实验材料 | 第79-81页 |
| ·菌种 | 第79页 |
| ·植物材料 | 第79页 |
| ·质粒载体 | 第79-80页 |
| ·酶及化学试剂 | 第80页 |
| ·主要仪器设备 | 第80页 |
| ·引物 | 第80-81页 |
| 2 实验方法 | 第81-92页 |
| ·酿酒酵母总RNA 的提取 | 第81页 |
| ·反转录PCR 扩增 | 第81-82页 |
| ·PCR 产物与T 载体的连接 | 第82-83页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第83页 |
| ·质粒的提取 | 第83-84页 |
| ·PCR 及酶切验证 | 第84页 |
| ·测序验证 | 第84-85页 |
| ·植物表达载体的构建及农杆菌的转化 | 第85页 |
| ·农杆菌质粒的提取与鉴定 | 第85页 |
| ·渗透法转化拟南芥 | 第85-86页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第86-87页 |
| ·转基因植株的Northern 杂交分析 | 第87-89页 |
| ·异硫氰酸胍法提取总RNA | 第87-88页 |
| ·RNA 电泳 | 第88页 |
| ·RNA 杂交膜的制备 | 第88页 |
| ·Northern 杂交探针的制备 | 第88-89页 |
| ·杂交过程 | 第89页 |
| ·不同浓度NaCl 胁迫下转基因拟南芥各生理指标的测定 | 第89-92页 |
| ·对照与转基因拟南芥在不同浓度NaCl 胁迫条件下的萌发率测定 | 第89页 |
| ·对照与转基因拟南芥在不同浓度NaCl 胁迫条件下根生长速率测定 | 第89-90页 |
| ·对照与转基因拟南界的NaCl 处理 | 第90页 |
| ·对照与转基因拟南芥质膜相对透性的测定 | 第90页 |
| ·对照与转基因拟南芥植株MDA 含量的测定 | 第90页 |
| ·对照与转基因拟南芥植株光合水平的测定 | 第90-91页 |
| ·对照与转基因拟南芥抗氧化保护酶SOD、POD、CAT、GR 及APX 活性的测定 | 第91-92页 |
| ·过氧化氢含量的测定 | 第92页 |
| 3 结果与分析 | 第92-103页 |
| ·转基因拟南芥转化子的筛选 | 第92-93页 |
| ·转基因拟南芥的PCR 检测 | 第93页 |
| ·转基因株系的 Northern 杂交分析 | 第93-94页 |
| ·转基因拟南芥的耐盐性分析 | 第94-103页 |
| ·对照及转YAP1 基因拟南芥在不同浓度NaCl 培养基上的萌发率 | 第94页 |
| ·对照及转YAP1 基因拟南芥在不同浓度NaCl 培养基上根的相对生长速率 | 第94-95页 |
| ·对照及转基因株系在不同浓度NaCl 胁迫条件下细胞膜相对透性的变化 | 第95页 |
| ·不同NaCl 胁迫条件下对照及转基因拟南芥MDA 含量的变化 | 第95-97页 |
| ·不同NaCl 胁迫条件下对照及转基因拟南芥PSⅡ最大光化学效率的变化 | 第97-98页 |
| ·不同NaCl 胁迫条件下对照及转基因拟南芥H202 含量的影响 | 第98-99页 |
| ·不同NaCl 胁迫条件下对照及转基因拟南芥抗氧化保护酶SOD、POD、CAT、APX、GST 及GR 活性的变化 | 第99-103页 |
| ·SOD 活性的变化 | 第99页 |
| ·POD 活性变化 | 第99-101页 |
| ·CAT 活性的变化 | 第101页 |
| ·APX 活性的变化 | 第101页 |
| ·GST 活性变化 | 第101页 |
| ·GR 活性变化 | 第101-103页 |
| ·对照及YAP1 转基因拟南芥在不同浓度NaCl 胁迫下的生长情况 | 第103页 |
| 4 讨论 | 第103-106页 |
| ·植物的盐害与活性氧 | 第103-104页 |
| ·抗氧化保护酶的协同调节控制细胞内的氧化还原状态 | 第104页 |
| ·转录因子与植物的抗盐性 | 第104-105页 |
| ·导入YAP1 基因对拟南芥耐盐性的影响及其作用 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-122页 |
| 英文缩写符号及中英对照表 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 图版 | 第124-125页 |
| 攻读博士学位期间整理发表的论文 | 第125页 |
