| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-46页 |
| 一、卤代甲烷酶促合成机制 | 第17-20页 |
| 1 卤代甲烷的生物产生机制 | 第17-18页 |
| 2 卤代甲烷甲基转移酶基因的克隆 | 第18-19页 |
| 3 卤代甲烷酶促反应机制的生物学意义 | 第19-20页 |
| 4 卤代甲烷的植物发生论 | 第20页 |
| 二、Na~+/H~+逆向转运蛋白 | 第20-38页 |
| 1 Na~+/H~+逆向转运蛋白的分子特性及转运机制 | 第21-27页 |
| ·Na~+/H~+逆向转运蛋白的进化分类和亚细胞定位 | 第21-23页 |
| ·Na~+/H~+逆向转运蛋白的拓扑结构和功能残基 | 第23-26页 |
| ·NHE 的结构与功能调节 | 第24页 |
| ·酵母和真菌质膜Na~+/H~+逆向转运蛋白C 端的功能 | 第24-25页 |
| ·植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白的结构 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌EcNhaA 的Na~+/H~+逆向转运机制 | 第26-27页 |
| 2 植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白 | 第27-31页 |
| ·植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因家族 | 第27-28页 |
| ·植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白阳离子选择性 | 第28页 |
| ·植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白与植物耐盐性 | 第28-30页 |
| ·植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白的其它功能 | 第30-31页 |
| 3 NHE/NHX Na~+/H~+逆向转运蛋白与囊泡运输 | 第31-33页 |
| 4 植物质膜Na~+/H~+逆向转运蛋白 | 第33-38页 |
| ·植物质膜Na~+/H~+逆向转运蛋白与植物耐逆的关系 | 第33-35页 |
| ·SOS 信号通路 | 第35-38页 |
| ·SOS 信号通路元件 | 第35-36页 |
| ·SOS 信号通路 | 第36-37页 |
| ·SOS 信号通路的保守性 | 第37-38页 |
| ·AtNHX8 | 第38页 |
| 三、囊泡介导的植物细胞可溶性物质的转运 | 第38-43页 |
| 1 囊泡参与盐的分泌 | 第39-40页 |
| 2 囊泡参与蜜的分泌 | 第40-41页 |
| 3 囊泡参与有机酸和蔗糖的分泌 | 第41-42页 |
| 4 囊泡参与保卫细胞和运动细胞的溶质运输 | 第42页 |
| 5 囊泡参与糖和黏附多糖的分泌 | 第42-43页 |
| 四、本实验的意义 | 第43-46页 |
| 1 甲基溴替代技术的开发 | 第43-44页 |
| 2 中华补血草泌盐机制探讨 | 第44-46页 |
| 第二部分 实验论文 | 第46-106页 |
| 第一章 卤代甲烷甲基转移酶基因转化烟草的研究 | 第46-73页 |
| 一、实验材料 | 第46-48页 |
| 1 植物材料及线虫 | 第46页 |
| 2 菌种及质粒 | 第46页 |
| 3 酶及化学试剂 | 第46页 |
| 4 主要仪器设备 | 第46-47页 |
| 5 质粒提取液 | 第47页 |
| 6 培养基 | 第47-48页 |
| 7 引物序列 | 第48页 |
| 二、实验方法 | 第48-61页 |
| 1 基本分子生物学实验技术 | 第49-55页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第49页 |
| ·质粒的提取 | 第49-50页 |
| ·PCR、酶切以及连接 | 第50页 |
| ·Gene Clean 方法从琼脂糖凝胶上回收外源基因片段 | 第50页 |
| ·植物基因组DNA 的提取及Southern 杂交膜的制备 | 第50-51页 |
| ·植物基因组DNA 的提取—CTAB 法 | 第50-51页 |
| ·Southern 杂交膜的制备 | 第51页 |
| ·Trizol 试剂提取植物总RNA | 第51-52页 |
| ·异硫氰酸胍法提取植物总RNA 及Northern 杂交膜的制备 | 第52-53页 |
| ·植物组织总RNA 的提取—异硫氰酸胍法 | 第52-53页 |
| ·Northern 杂交膜的制备 | 第53页 |
| ·RNA 甲醛变性胶电泳 | 第53页 |
| ·RNA 杂交膜的制备 | 第53页 |
| ·Southern 杂交和Northern 杂交分析 | 第53-54页 |
| ·cDNA 探针的制备 | 第53-54页 |
| ·杂交过程 | 第54页 |
| ·洗膜及显影 | 第54页 |
| ·Western 杂交 | 第54-55页 |
| ·植物蛋白的提取方法一 | 第54页 |
| ·植物蛋白的提取方法二—丙酮沉淀法 | 第54-55页 |
| ·SDS-PAGE | 第55页 |
| ·转膜 | 第55页 |
| ·Western 检测 | 第55页 |
| 2 ThMCT、SsMCT 基因的克隆 | 第55-58页 |
| ·ThMCT、SsMCT 基因保守区的克隆 | 第55-56页 |
| ·ThMCT、SsMCT 基因5’端序列的克隆 | 第56-58页 |
| ·ThMCT、SsMCT 基因3’端序列的克隆 | 第58页 |
| 3 AtMCT、ThMCT 和SsMCT 基因过量表达载体的构建 | 第58-59页 |
| 4 植物表达载体的农杆菌转化与鉴定 | 第59页 |
| 5 农杆菌介导的烟草转化 | 第59-60页 |
| 6 转基因烟草的PCR 鉴定 | 第60页 |
| 7 转基因烟草卤代甲烷释放量的测定 | 第60-61页 |
| 8 转基因烟草的线虫抗性实验 | 第61页 |
| 三、实验结果 | 第61-71页 |
| 1 MCT 基因的克隆及序列分析 | 第61-66页 |
| ·ThMCT 基因的克隆 | 第61-62页 |
| ·SsMCT 基因的克隆 | 第62-63页 |
| ·ThMCT 和SsMCT 的氨基酸序列分析 | 第63-64页 |
| ·ThMCT 和SsMCT 的系统谱系分析 | 第64-65页 |
| ·AtMCT、ThMCT 和SsMCT 的拓扑结构分析 | 第65-66页 |
| 2 AtMCT、ThMCT 和SsMCT 基因过量表达载体的构建 | 第66页 |
| 3 植物表达载体的农杆菌转化与鉴定 | 第66页 |
| 4 农杆菌介导的烟草转化 | 第66页 |
| 5 转基因烟草的分子鉴定 | 第66-69页 |
| ·转基因烟草的PCR 分析 | 第66页 |
| ·转基因烟草的Southern 杂交分析 | 第66-67页 |
| ·转基因烟草的Northern 杂交分析 | 第67-68页 |
| ·转基因烟草的Western 杂交分析 | 第68-69页 |
| 6 转基因烟草卤代甲烷释放量的测定 | 第69-70页 |
| 7 转基因烟草的线虫抗性实验 | 第70-71页 |
| 四、讨论 | 第71-73页 |
| 1 ThMCT 和SsMCT 的序列特征 | 第71页 |
| 2 过量表达AtMCT 提高了转基因烟草对线虫的抗性 | 第71-73页 |
| 第二章 中华补血草LsNHXs 基因的功能研究 | 第73-106页 |
| 一、实验材料 | 第73-75页 |
| 1 植物材料 | 第73页 |
| 2 菌种及质粒 | 第73页 |
| 3 酶及化学试剂 | 第73页 |
| 4 主要仪器设备 | 第73页 |
| 5 质粒提取液 | 第73页 |
| 6 培养基 | 第73-74页 |
| 7 引物序列 | 第74-75页 |
| 二、实验方法 | 第75-84页 |
| 1 基本分子生物学实验技术 | 第75-77页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第75页 |
| ·质粒的提取 | 第75页 |
| ·PCR、酶切以及连接 | 第75页 |
| ·Gene Clean 方法从琼脂糖凝胶上回收外源基因片段 | 第75页 |
| ·植物基因组DNA 的提取及Southern 杂交分析 | 第75页 |
| ·Trizol 法和异硫氰酸胍法提取植物总RNA | 第75页 |
| ·CTAB 改良法提取中华补血草总RNA | 第75-76页 |
| ·DNaseI (RNase Free) 去除补血草RNA 中的基因组DNA | 第76-77页 |
| 2 中华补血草LsNHXs 基因的克隆 | 第77-78页 |
| ·中华补血草LsNHXs 基因保守区的克隆 | 第77页 |
| ·LsNHX2 和LsNHX3 基因3’端序列的克隆 | 第77-78页 |
| 3 LsNHXs 基因RNAi 沉默表达载体的构建 | 第78-79页 |
| ·LsNHX1、LsNHX2、LsNHX3 单基因RNAi 沉默表达载体的构建 | 第78-79页 |
| ·LsNHX1+LsNHX2 双基因RNAi 沉默表达载体的构建 | 第79页 |
| 4 植物表达载体的农杆菌转化与鉴定 | 第79-80页 |
| 5 中华补血草的遗传转化 | 第80页 |
| ·农杆菌菌液的制备 | 第80页 |
| ·补血草叶片的转化 | 第80页 |
| ·抗性芽的生根 | 第80页 |
| ·抗性苗的快速繁殖及移栽 | 第80页 |
| 6 转基因补血草的分子鉴定 | 第80-82页 |
| ·转基因补血草的PCR 鉴定 | 第80-81页 |
| ·转基因补血草LsNHXs 基因表达的Real-time PCR 分析 | 第81-82页 |
| ·补血草RNA 的提取及定量 | 第81页 |
| ·RNA 的反转录及cDNA 模板的稀释 | 第81页 |
| ·实时定量PCR 引物的设计 | 第81-82页 |
| ·实时定量PCR（Real-time PCR） | 第82页 |
| ·Real Time PCR 数据分析的方法 | 第82页 |
| 7 转基因补血草的耐逆性分析 | 第82-84页 |
| ·野生型与转基因补血草的快速繁殖 | 第82-83页 |
| ·野生型与转基因补血草的盐胁迫处理 | 第83页 |
| ·叶片表面分泌物中Na~+、K~+离子含量的测定 | 第83页 |
| ·叶面积的测定 | 第83页 |
| ·叶片组织内Na~+、K~+离子含量的测定 | 第83页 |
| ·植物材料含水量的测定 | 第83-84页 |
| 三、实验结果 | 第84-103页 |
| 1 中华补血草LsNHXs 基因的克隆 | 第84-89页 |
| ·中华补血草RNA 的提取 | 第84页 |
| ·中华补血草LsNHXs 基因保守区的克隆 | 第84-86页 |
| ·LsNHX2 和LsNHX3 基因3’端序列的克隆 | 第86-89页 |
| 2 LsNHXs 基因RNAi 沉默表达载体的构建 | 第89-92页 |
| ·LsNHXs 单基因RNAi 沉默表达载体的构建及酶切验证 | 第89-90页 |
| ·LsNHXs 单基因RNAi 沉默表达载体的构建 | 第89-90页 |
| ·LsNHXs 单基因RNAi 沉默表达载体的酶切验证 | 第90页 |
| ·LsNHX1+LsNHX2 双基因RNAi 沉默表达载体的构建及酶切验证 | 第90-92页 |
| 3 植物基因RNAi 沉默表达载体的农杆菌转化及PCR 验证 | 第92页 |
| 4 中华补血草的遗传转化 | 第92页 |
| 5 转基因补血草的分子鉴定 | 第92-96页 |
| ·转基因补血草的PCR 鉴定 | 第92-93页 |
| ·转基因补血草的Southern 杂交分析 | 第93-94页 |
| ·转基因补血草LsNHXs 基因表达的Real-time PCR 分析 | 第94-96页 |
| 6 转基因补血草的耐逆性分析 | 第96-103页 |
| ·LsNHX2 转基因补血草的耐逆性分析 | 第96-98页 |
| ·LsNHX2 转基因补血草在不同盐胁迫条件下的生长情况 | 第96页 |
| ·盐处理对LsNHX2 转基因植株与野生型植株含水量的影响 | 第96页 |
| ·盐处理对LsNHX2 转基因植株与野生型植株叶片表面分泌物中Na~+、K~+离子含量的影响 | 第96-97页 |
| ·盐处理对LsNHX2 转基因植株与野生型植株叶片组织内Na~+、K~+离子含量的影响 | 第97-98页 |
| ·LsNHX1、LsNHX3 和LsNHX1~+LsNHX2 转基因补血草的耐逆性分析 | 第98-103页 |
| ·LsNHX1、LsNHX3 和LsNHX1+LsNHX2 转基因补血草在不同盐胁迫条件下的生长情况 | 第98页 |
| ·盐处理对LsNHX1、LsNHX3 和LsNHX1+LsNHX2 转基因植株与野生型植株含水量的影响 | 第98-99页 |
| ·盐处理对LsNHX1 转基因植株与野生型植株叶片表面分泌物中Na~+、K~+离子含量的影响 | 第99-100页 |
| ·盐处理对LsNHX1 转基因植株与野生型植株叶片组织内Na~+、K~+离子含量的影响 | 第100页 |
| ·盐处理对LsNHX3 转基因植株与野生型植株叶片表面分泌物中Na~+、K~+离子含量的影响 | 第100-101页 |
| ·盐处理对LsNHX3 转基因植株与野生型植株叶片组织内Na~+、K~+离子含量的影响 | 第101页 |
| ·盐处理对LsNHX1+LsNHX2 转基因植株与野生型植株叶片表面分泌物中Na~+、K~+离子含量的影响 | 第101-102页 |
| ·盐处理对LsNHX1+LsNHX2 转基因植株与野生型植株叶片组织内Na~+、K~+离子含量的影响.. | 第102-103页 |
| 四、讨论 | 第103-106页 |
| 1 中华补血草RNA 的提取 | 第103-104页 |
| 2 RNAi 技术在植物功能基因组学研究中的应用 | 第104页 |
| 3 中华补血草液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白LsNHXs 对其耐盐性的影响 | 第104-106页 |
| 图版 | 第106-110页 |
| 参考文献 | 第110-121页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
