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平邑甜茶IPT3基因的克隆及其对氮信号响应特性

中文摘要第1-11页
英文摘要第11-13页
1 前言第13-23页
   ·氮信号对植物物质代谢的调控第13-14页
   ·氮信号对植物生长发育的调控第14-15页
   ·植物中推测的两个氮信号感应系统第15-17页
     ·PII 介导的N 感应第15-16页
     ·细胞分裂素和His-Asp 磷酸根中继第16-17页
   ·细胞分裂素的合成第17-18页
   ·IPT 在细胞分裂素合成中的重要作用第18-19页
     ·AMP 途径第18页
     ·ATP/ADP 途径第18页
     ·旁路的途径(alternative pathway)第18-19页
   ·其它植物上编码异戊烯基转移酶基因IPT 的鉴定第19-21页
     ·拟南芥IPT 基因的鉴定第19-21页
     ·其它植物上IPT 基因的鉴定第21页
   ·氮信号对细胞分裂素生物合成的调控第21页
   ·本研究的目的和意义第21-23页
2 材料与方法第23-42页
   ·实验材料第23-26页
     ·植物材料与处理第23页
     ·菌株与质粒第23页
     ·酶及生化试剂第23页
     ·PCR 引物第23-24页
     ·培养基第24-26页
   ·实验方法第26-42页
     ·植物材料总 RNA 的提取第26页
     ·反转录cDNA 第一链的合成(用于3′RACE)第26-27页
     ·反转录cDNA 第一链的合成(用于5′RACE)第27页
     ·cDNA 全长基因序列的获得第27-29页
       ·3′端基因片段的克隆第27-28页
       ·5′RACE 获得5′端基因序列第28-29页
     ·DNA 片段与克隆载体的连接第29页
     ·凝胶电泳中 DNA 片段的回收第29-30页
     ·碱法小量质粒 DNA 的提取第30-31页
     ·DNA 序列测定第31页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第31-32页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第31页
       ·大肠杆菌感受态细胞的转化第31-32页
     ·根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备与转化第32页
       ·感受态细胞的制备第32页
       ·冻融法农杆菌转化第32页
     ·基因组 DNA 提取(CTAB 法)第32-33页
     ·原核表达平邑甜茶异戊烯基转移酶MhIPT3 蛋白第33-36页
       ·原核表达载体的构建第33-35页
       ·大肠杆菌BL21 原核表达的诱导第35页
       ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第35-36页
     ·MhIPT3 正反义表达载体的构建第36-37页
     ·实时荧光定量 PCR第37-38页
     ·‘皇家嘎拉’苹果的转化第38-39页
       ·组织培养所用培养基第38页
       ·转化步骤第38-39页
     ·农杆菌介导的烟草的转化第39-40页
     ·转基因植株的检测第40页
     ·叶面积的测定第40页
     ·激素的测定第40页
     ·本研究使用的软件第40-42页
3 结果与分析第42-59页
   ·异戊烯基转移酶基因(MhIPT3)的分离第42-43页
     ·MhIPT3 3′端基因片段的分离第42页
     ·MhIPT3 5′片段的分离第42页
     ·MhIPT3 全长cDNA 的分离第42-43页
   ·异戊烯基转移酶基因(MhIPT3)的序列分析第43-50页
   ·MhIPT3 在大肠杆菌中的表达第50-51页
     ·原核表达载体的构建第50页
     ·重组蛋白表达与SDS-PAGE 分析第50-51页
   ·转基因烟草表达载体pBI121-MhIPT3 的构建及转基因烟草的鉴定第51-53页
   ·‘皇家嘎拉’苹果特异表达载体pBI121-MhIPT3 的构建第53-54页
   ·基因的表达特性分析第54-55页
     ·MhIPT3 在不同组织中的表达第54页
     ·不同形态氮素对MhIPT3 表达的影响第54-55页
   ·不同形态氮素对细胞分裂素含量的影响第55-57页
     ·不同形态氮素对Z+ZR 含量的影响第55-56页
     ·不同形态氮素对iP+iPA 含量的影响第56-57页
   ·不同形态氮素对叶片中IAA 和ABA 含量的影响第57页
   ·不同形态氮素对平邑甜茶叶面积及生长的影响第57-59页
4 讨论第59-62页
   ·MhIPT3基因编码平邑甜茶异戊烯基转移酶第59-60页
   ·硝态氮促进平邑甜茶幼苗生长与MhIPT3表达、细胞分裂素含量的关系第60-62页
5 结论第62-63页
参考文献第63-74页
致谢第74-75页
硕士在读期间形成的论文第75页

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