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番茄紫黄质脱环氧化酶基因的体外表达及功能分析

英文缩写符号及中英文对照表第1-13页
中文摘要第13-15页
英文摘要第15-18页
1 引言第18-30页
   ·光合作用的光抑制第18-22页
     ·光抑制的发生机理第18-19页
     ·光抑制、光破坏的防御第19-22页
       ·减少光吸收,增加光能利用能力第19页
       ·通过状态转换向PSI 分配较多的光能第19-20页
       ·依赖于叶黄素循环的热耗散第20-21页
       ·光呼吸第21页
       ·Mehler 反应第21-22页
   ·叶黄素循环的组成第22-25页
     ·叶黄素循环的主要功能第22-25页
       ·热耗散第23-24页
       ·防止膜脂过氧化第24页
       ·稳定类囊体膜结构第24页
       ·与ABA 合成途径第24-25页
       ·蓝光的响应第25页
   ·紫黄质脱环氧酶(VDE)第25-29页
     ·紫黄质脱环氧化酶的分子特性第25-26页
     ·紫黄质脱环氧化酶的调节第26-28页
       ·pH 值第26-27页
       ·膜脂第27页
       ·抗坏血酸(Vc)第27页
       ·巯基化合物和o-菲啶第27页
       ·温度第27-28页
       ·UV-B第28页
     ·紫黄质脱环氧化酶基因的研究第28-29页
       ·VDE 基因的克隆第28页
       ·VDE 基因的拷贝数第28页
       ·VDE 基因mRNA 的器官特异性表达第28页
       ·光强对VDE mRNA 水平表达的影响第28-29页
   ·本研究的目的、意义第29-30页
2 材料与方法第30-49页
   ·试验材料与处理第30-31页
     ·植物材料第30页
     ·材料处理第30页
       ·番茄的处理第30页
       ·烟草的处理第30页
     ·菌株与质粒第30-31页
     ·酶及生化试剂第31页
     ·PCR 引物第31页
   ·试验方法第31-49页
     ·总RNA 的提取第31-33页
     ·RNA 反转录第33页
     ·番茄紫黄质脱环氧化酶基因全长的克隆第33-34页
     ·真核表达载体的构建第34-40页
       ·载体构建第34-35页
       ·连接第35页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第35-36页
       ·转化及克隆筛选第36页
       ·碱法小量提取质粒DNA第36-37页
       ·质粒DNA 的酶切鉴定第37页
       ·电泳目的基因片段的回收第37-38页
       ·DNA 序列测定第38页
       ·根癌农杆菌LBA4404 感受态细胞的制备及转化第38-40页
         ·农杆菌感受态细胞的制备第38-39页
         ·冻融法转化农杆菌第39页
         ·农杆菌介导转化烟草第39-40页
     ·转基因烟草植株的PCR 检测第40-41页
       ·CTAB 法微量法提取基因组DNA第40页
       ·转基因植株的PCR 筛选第40-41页
       ·基因表达的半定量PCR 分析第41页
     ·紫黄质脱环氧化酶的原核表达及Western 杂交第41-46页
       ·原核表达载体的构建第41-42页
       ·E.coli BL21 原核表达的诱导第42页
       ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第42-43页
       ·目的蛋白纯化第43页
       ·抗体制备第43-44页
       ·抗血清效价的测定(试管微量沉淀法)第44页
       ·Western 杂交过程第44-46页
     ·转基因番茄生理指标的测定第46-49页
       ·净光合速率的测定第46-47页
       ·叶绿素荧光参数的测定第47页
       ·叶黄素循环色素组分分析第47页
       ·过氧化氢(H_2O_2)含量的测定第47-48页
       ·O_2~(-|—) 的测定第48页
       ·丙二醛(MDA)含量的测定第48页
       ·叶绿素含量的测定第48页
       ·可溶性蛋白的测定第48-49页
3 结果与分析第49-67页
   ·番茄VDE 基因的克隆第49-50页
     ·番茄叶片总RNA 的提取及反转录第49页
     ·番茄VDE 基因全长的克隆第49-50页
   ·番茄VDE 基因的特征分析第50-53页
     ·LeVDE 氨基酸序列同源性分析第50-52页
     ·LeVDE 基因编码蛋白的生化特性分析第52-53页
       ·编码基因蛋白的疏水性分析第52页
       ·番茄VDE 蛋白的跨膜特性分析第52-53页
   ·LeVDE 在大肠杆菌中的表达第53-56页
     ·原核表达载体pET::LeVDE 的构建第53-54页
     ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳第54-55页
     ·低温弱光和强光下LeVDE 在蛋白水平的表达特征第55-56页
   ·LeVDE 转化烟草第56-60页
     ·正、反义表达载体的构建第56-57页
     ·表达载体的检测第57-60页
   ·转LeVDE 基因对总叶绿素含量以及叶绿素a/b 的影响第60-61页
   ·过量和抑制LeVDE 的表达影响PSII 对光抑制的敏感性第61-67页
     ·过量和抑制LeVDE的表达在强光胁迫下对PSII光抑制敏感性的影响第61-62页
       ·LeVDE 的过量和抑制表达对叶黄素循环脱环氧化状态的影响第61页
       ·过量与抑制LeVDE 的表达对强光胁迫下NPQ 的影响第61-62页
       ·过量与抑制 LeVDE 的表达对强光胁迫下对光合速率的影响第62页
       ·过量与抑制LeVDE 的表达对强光胁迫下对Fv/Fm的影响第62页
     ·过量和抑制LeVDE表达在低温弱光胁迫下对PSII光抑制敏感性的影响第62-67页
       ·LeVDE 的过量表达和抑制对低温弱光胁迫下叶黄素循环脱环氧化状态和NPQ 的影响第62-64页
       ·过量与抑制 LeVDE 的表达在低温弱光胁迫下对光合速率的影响第64-65页
       ·过量与抑制LeVDE 的表达在低温弱光胁迫下对Fv/Fm的影响第65页
       ·过量与抑制 LeVDE 的表达在低温弱光胁迫下对的 H_2O_2和O_2~(-|—) 的影响第65页
       ·过量与抑制LeVDE 的表达在低温弱光胁迫下对的MDA的影响第65-67页
4 讨论第67-70页
   ·LeVDE 基因编码紫黄质脱环氧化酶第67-68页
   ·过量和抑制 LeVDE 的表达在强光和低温弱光胁迫下对 PSII光抑制敏感性的影响第68-70页
5 主要结论第70-71页
参考文献第71-79页
攻读学位期间撰写的论文第79-80页
致谢第80页

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