| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-49页 |
| 1.猪传染性胃肠炎病毒研究进展 | 第16-28页 |
| ·TGEV的一般生物学特征 | 第16-17页 |
| ·TGEV的感染与流行特点 | 第17-18页 |
| ·TGEV致病机理 | 第18-19页 |
| ·TGEV基因组结构、复制与表达 | 第19-20页 |
| ·TGEV结构蛋白及功能研究 | 第20-23页 |
| ·TGEV基因工程疫苗的研究 | 第23-28页 |
| 2.增强DNA疫苗免疫效果的研究进展 | 第28-40页 |
| ·目的基因的选择与修饰 | 第29-32页 |
| ·DNA疫苗载体的优化 | 第32-34页 |
| ·DNA疫苗免疫接种途径与方法的优化 | 第34-37页 |
| ·利用细胞因子佐剂提高DNA疫苗的有效性 | 第37-40页 |
| 3.减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的研究进展 | 第40-49页 |
| ·沙门氏菌简介 | 第40-41页 |
| ·沙门氏菌的基因缺失减毒 | 第41-44页 |
| ·减毒沙门氏菌的侵入途径 | 第44-45页 |
| ·携带DNA疫苗的减毒沙门氏菌诱发免疫应答的机制 | 第45-47页 |
| ·减毒沙门氏菌的作为DNA疫苗载体的优势与应用 | 第47-49页 |
| 第二章 猪传染性胃肠炎病毒S基因与N基因的克隆及真核表达质粒的构建 | 第49-72页 |
| 1.引言 | 第49页 |
| 2.材料 | 第49-51页 |
| ·毒株、菌株、质粒和细胞 | 第49-50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·试剂配制 | 第50-51页 |
| ·主要仪器设备 | 第51页 |
| 3.方法 | 第51-59页 |
| ·TGEV S基因与N基因扩增用引物设计 | 第51-52页 |
| ·TGEV的增殖 | 第52页 |
| ·TGEV RNA的提取 | 第52页 |
| ·TGEV S基因与N基因的RT-PCR扩增 | 第52-54页 |
| ·TGEV S基因与N基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·TGEV S基因与N基因T-A克隆质粒的鉴定 | 第55-56页 |
| ·TGEV S基因与N基因的核苷酸序列测定与分析 | 第56页 |
| ·TGEV S基因与N基因表达质粒pVAX-S与pVAX-N的构建 | 第56-57页 |
| ·TGEV S基因N基因融合表达质粒pVAX-S-N的构建 | 第57-58页 |
| ·TGEV S基因与N基因真核表达质粒的体外表达 | 第58-59页 |
| 4.结果与分析 | 第59-69页 |
| ·TGEV的增殖结果 | 第59-60页 |
| ·TGEV S基因N基因的RT-PCR结果 | 第60-61页 |
| ·TGEV S基因N基因T-A克隆质粒的鉴定结果 | 第61-62页 |
| ·TGEV S基因与N基因核苷酸序列测定结果 | 第62-65页 |
| ·同源性比较结果 | 第65-66页 |
| ·TGEV S蛋白N端与N蛋白的亲水性、表面性与抗原性预测分析 | 第66-67页 |
| ·TGEV S基因N基因真核表达质粒鉴定结果 | 第67-68页 |
| ·三种构建的真核表达质粒表达检测结果 | 第68-69页 |
| 5.讨论 | 第69-71页 |
| 6.小结 | 第71-72页 |
| 第三章 猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因与猪白细胞介素6基因的克隆及表达 | 第72-99页 |
| 1.引言 | 第72-73页 |
| 2.材料 | 第73-74页 |
| ·菌株与质粒 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·试剂配制 | 第73-74页 |
| ·主要仪器设备 | 第74页 |
| 3.方法 | 第74-81页 |
| ·猪外周血淋巴细胞的分离与诱导培养 | 第74-75页 |
| ·猪外周血淋巴细胞总RNA的提取 | 第75页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6基因扩增用引物设计 | 第75-76页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6基因的RT-PCR扩增 | 第76-77页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6基因的克隆 | 第77页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6基因T-A克隆质粒的鉴定 | 第77页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6基因克隆重组质粒的序列测定与分析 | 第77-78页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6原核表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达 | 第78-80页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6原核表达重组蛋白的纯化 | 第80页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6重组蛋白多克隆抗血清的制备 | 第80-81页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6真核表达质粒的构建 | 第81页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6真核表达质粒的体外表达 | 第81页 |
| 4.结果与分析 | 第81-95页 |
| ·pGM-CSF及pIL-6基因的RT-PCR扩增结果 | 第81-82页 |
| ·pGM-CSF及pIL-6基因克隆的鉴定结果 | 第82-83页 |
| ·pGM-CSF及pIL-6基因核苷酸序列测定及氨基酸序列推导结果 | 第83-85页 |
| ·pGM-CSF及pIL-6基因序列分析结果 | 第85-91页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6原核表达质粒的构建结果 | 第91-92页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6基因在大肠杆菌中的表达结果 | 第92-93页 |
| ·rpGM-CSF与rpIL-6重组蛋白的纯化结果 | 第93-94页 |
| ·pGM-CSF与pIL-6基因真核表达质粒的鉴定结果 | 第94-95页 |
| ·pVAX-GM与pVAX-IL6表达产物的Western-blot检测结果 | 第95页 |
| 5.讨论 | 第95-97页 |
| 6.小结 | 第97-99页 |
| 第四章 TGEV DNA疫苗免疫原性的研究 | 第99-112页 |
| 1.引言 | 第99-100页 |
| 2.材料 | 第100-102页 |
| ·质粒 | 第100页 |
| ·主要试剂 | 第100页 |
| ·试验动物 | 第100页 |
| ·试剂配制 | 第100-101页 |
| ·主要仪器设备 | 第101-102页 |
| 3.方法 | 第102-105页 |
| ·TGEV DNA疫苗的制备 | 第102-103页 |
| ·TGEV DNA疫苗肌肉注射小鼠免疫原性的研究 | 第103-105页 |
| 4.结果与分析 | 第105-109页 |
| ·TGEV DNA疫苗用质粒纯度的鉴定结果 | 第105页 |
| ·TGEV DNA疫苗免疫后特异性抗TGEV血清IgG抗体的检测结果 | 第105-108页 |
| ·TGEV DNA疫苗免疫后外周血T淋巴细胞亚类的检测结果 | 第108-109页 |
| 5.讨论与小结 | 第109-111页 |
| 6.小结 | 第111-112页 |
| 第五章 减毒沙门氏菌携带TGEV S基因DNA疫苗口服免疫的研究 | 第112-130页 |
| 1.引言 | 第112-113页 |
| 2.材料 | 第113-114页 |
| ·菌株与质粒 | 第113页 |
| ·主要试剂 | 第113页 |
| ·主要仪器 | 第113-114页 |
| 3.方法 | 第114-118页 |
| ·携带TGEV S基因DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建 | 第114-115页 |
| ·重组沙门氏菌体外感染小鼠腹腔巨噬细胞实验 | 第115页 |
| ·重组沙门氏菌体内感染小鼠后RT-PCR检测S基因的转录 | 第115-117页 |
| ·体外重组沙门氏菌中质粒的稳定性 | 第117页 |
| ·重组沙门氏菌对小鼠的安全性试验 | 第117页 |
| ·重组沙门氏菌对小鼠的免疫原性试验 | 第117-118页 |
| 4.结果与分析 | 第118-126页 |
| ·携带TGEV DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建 | 第118-119页 |
| ·沙门氏菌传递的质粒在巨噬细胞中的表达 | 第119-120页 |
| ·重组沙门氏菌体内感染小鼠后RT-PCR检测S基因的转录 | 第120页 |
| ·重组沙门氏菌对小鼠的安全性试验 | 第120-121页 |
| ·体外重组沙门氏菌中质粒的稳定性 | 第121-122页 |
| ·TGEV血清IgG和肠道粘膜IgA抗体的间接ELISA检测 | 第122-124页 |
| ·沙门氏菌血清IgG和肠道粘膜IgA抗体的间接ELISA检测 | 第124-126页 |
| 5.讨论 | 第126-129页 |
| 6.小结 | 第129-130页 |
| 结论 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-150页 |
| 附件材料 | 第150-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 作者简介 | 第153页 |
