| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1 热休克蛋白的概述 | 第11-15页 |
| ·热休克蛋白的发现 | 第11页 |
| ·热休克蛋白的分类 | 第11页 |
| ·热休克蛋白的一般特征 | 第11-12页 |
| ·热休克蛋白的功能及其作用机理 | 第12-14页 |
| ·热休克蛋白的应用与讨论 | 第14-15页 |
| 2 PRRSV的概述 | 第15-23页 |
| ·PRRSV的发现 | 第15-16页 |
| ·PRRSV的病毒学特征 | 第16-17页 |
| ·PRRSV的病毒学分类与特性 | 第16-17页 |
| ·PRRSV的理化性质和生长特性 | 第17页 |
| ·PRRSV的分子生物学特征 | 第17-20页 |
| ·PRRSV的基因组特征 | 第17-18页 |
| ·PRRSV的主要结构蛋白 | 第18-20页 |
| ·PRRSV的基因变异 | 第20页 |
| ·PRRSV的检测与诊断 | 第20-21页 |
| ·PRRSV的疫苗研究进展及存在问题 | 第21-23页 |
| 3 本试验的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 结核杆菌HSP70基因的克隆 | 第24-33页 |
| 1 材料 | 第24-26页 |
| ·试剂与引物 | 第24页 |
| ·菌株和载体 | 第24-25页 |
| ·溶液的配制 | 第25-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-30页 |
| ·卡介苗基因组的提取 | 第26页 |
| ·PCR扩增HSP70基因 | 第26-27页 |
| ·HSP70基因的克隆与鉴定 | 第27-30页 |
| 3 结果 | 第30-31页 |
| ·卡介苗HSP70基因的PCR扩增 | 第30页 |
| ·重组质粒pMD18-T-HSP70的PCR和双酶切电泳结果 | 第30-31页 |
| ·卡介苗HS70基因重组质粒的序列测定 | 第31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| ·卡介苗的选用 | 第31页 |
| ·结核分枝杆菌基因组的提取 | 第31-32页 |
| ·HSP70基因的克隆与鉴定 | 第32-33页 |
| 第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆 | 第33-42页 |
| 1 材料 | 第33-35页 |
| ·试剂与引物 | 第33-34页 |
| ·菌株和载体 | 第34页 |
| ·溶液的配制 | 第34-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-39页 |
| ·PRRSV总RNA的抽提 | 第35页 |
| ·PT-PCR扩增目的基因ORF5 | 第35-36页 |
| ·目的基因ORF5的克隆与鉴定 | 第36-39页 |
| 3 结果 | 第39-42页 |
| ·RT-PCR扩增PRRSV-ORF5基因的电泳结果 | 第39-40页 |
| ·目的基因ORF5重组质粒的PCR和双酶切电泳结果 | 第40-41页 |
| ·目的基因ORF5重组质粒的测序结果 | 第41-42页 |
| 第四章 融合基因原核表达载体pET32(a)+-ORF5-HSP70的构建 | 第42-52页 |
| 1 材料 | 第42-44页 |
| ·试剂和引物 | 第42-43页 |
| ·菌株与载体 | 第43页 |
| ·溶液的配制 | 第43-44页 |
| ·主要仪器和设备 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-50页 |
| ·构建重组质粒pET32a(+)-ORF5 | 第44-47页 |
| ·双酶切pMD18-ORF5和pET-32a(+) | 第44-45页 |
| ·回收目的片段ORF5与线性化pET-32a(+) | 第45页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·连接目的片段ORF5与线性化pET-32a(+) | 第45页 |
| ·转化 | 第45-46页 |
| ·OFR5基因重组质粒DNA的小量制备 | 第46页 |
| ·ORF5基因重组质粒的PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·ORF5基因重组质粒的双酶切鉴定 | 第47页 |
| ·ORF5基因重组质粒的测序鉴定 | 第47页 |
| ·构建重组质粒pET32a(+)-ORF5-HSP70 | 第47-50页 |
| ·双酶切重组质粒pET32a(+)-ORF5和pMD18-HSP70 | 第47-48页 |
| ·回收目的片段HSP70与线性化pET32a(+)-ORF5 | 第48页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·连接目的片段ORF5和线性化的pET32a(+)-ORF5 | 第48页 |
| ·转化 | 第48页 |
| ·融合基因ORF5-HSP70重组质粒DNA的小量制备 | 第48页 |
| ·融合基因ORF5-HSP70重组质粒的PCR鉴定 | 第48-49页 |
| ·融合基因ORF5-HSP70重组质粒的双酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·融合基因ORF5-HSP70重组质粒的测序鉴定 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-51页 |
| ·融合基因ORF5-HSP70重租质粒的PCR鉴定结果 | 第50页 |
| ·融合基因ORF5-HSP70重组质粒的双酶切鉴定结果 | 第50页 |
| ·融合基因ORF5-HSP70重组质粒的测序结果 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| ·融合基因ORF5-HSP70原核表达载体pET32a(+)的选择 | 第51页 |
| ·融合基因原核表达质粒pET32a(+)-ORF5-HSP70的构建 | 第51-52页 |
| 第五章 融合基因ORF5-HSP70的原核表达与鉴定 | 第52-69页 |
| 1 材料 | 第52-55页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·菌种 | 第52页 |
| ·主要仪器设备 | 第52页 |
| ·主要溶液的配制 | 第52-55页 |
| 2 方法 | 第55-61页 |
| ·融合基因ORF5-HSP70的原核表达 | 第56-58页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-ORF5-HSP70转化至宿主菌BL21中 | 第56页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-ORF5-HSP70的原核表达与SDS-PAGE分析 | 第56-57页 |
| ·融合表达蛋白的可溶性检测 | 第57-58页 |
| ·融合基因原核表达的条件优化 | 第58页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第58页 |
| ·诱导时间的优化 | 第58页 |
| ·诱导温度的优化 | 第58页 |
| ·重组蛋白的免疫印迹印迹分析(Western-blot) | 第58-61页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第59页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第59-60页 |
| ·SDS-PAGE | 第60页 |
| ·湿法转移电泳条带 | 第60页 |
| ·免疫与显色 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白的浓度测定 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-66页 |
| ·融合基因ORF5-HSP70表达蛋白的PAGE分析 | 第61-62页 |
| ·融合表达条件优化 | 第62-65页 |
| ·IPTG诱导浓度的优化 | 第62-63页 |
| ·诱导时间的优化 | 第63-64页 |
| ·诱导温度的优化 | 第64-65页 |
| ·重组蛋白的纯化和免疫印迹分析(Western-blot) | 第65-66页 |
| ·重组蛋白的浓度测定 | 第66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| ·融合基因ORF5-HSP70的诱导表达、可溶性分析与条件优化 | 第66-67页 |
| ·ORF5-HSP70融合蛋白包涵体的形成 | 第67-68页 |
| ·重组蛋白的纯化与Western-Blot分析 | 第68-69页 |
| 全文结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-76页 |
