| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 1. 前言 | 第12-30页 |
| ·禽传染性支气管炎研究概述 | 第12-13页 |
| ·禽传染性支气管炎病毒的基因组结构和N蛋白 | 第13-15页 |
| ·禽传染性支气管炎疫苗研究进展 | 第15-18页 |
| ·减毒沙门氏菌作为活载体疫苗的研究进展 | 第18-23页 |
| ·减毒沙门氏菌疫苗安全性和激发粘膜免疫的特点 | 第23-24页 |
| ·染色体-质粒平衡致死系统减毒沙门氏菌X4550和相关载体 | 第24-27页 |
| ·绿色荧光蛋白在分子生物学上应用 | 第27-28页 |
| ·IBV减毒沙门氏菌活载体疫苗免疫原性的评价方法 | 第28-29页 |
| ·本课题的前期工作基础 | 第29-30页 |
| ·存在的主要问题 | 第30页 |
| ·本研究的目的意义和创新点 | 第30页 |
| 2. 材料 | 第30-32页 |
| ·毒株,载体,减毒沙门氏菌,试验鸡 | 第30-31页 |
| ·主要试剂及配置方法 | 第31页 |
| ·主要仪器设备与实验耗材 | 第31-32页 |
| 3. 方法 | 第32-45页 |
| ·禽传染性支气管炎病毒减毒沙门氏菌疫苗的构建与鉴定 | 第32-38页 |
| ·实验操作的技术路线 | 第32-33页 |
| ·N基因的RT-PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·N基因PYA3342表达质粒的构建 | 第34-36页 |
| ·N基因PYA3342重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒PYA3342-N转化减毒沙门氏菌构建重组菌X4550(PYA3342-N) | 第37-38页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE和westen blot分析 | 第38页 |
| ·重组减毒沙门氏菌X4550(PYA3342-N)安全性和体内稳定性检测 | 第38-39页 |
| ·接种重组菌的准备 | 第38页 |
| ·免疫鸡和取样 | 第38-39页 |
| ·重组菌的安全性和稳定性试验 | 第39页 |
| ·带荧光GFP重组减毒沙门氏菌x4550(PYA3342-GFP)禽体内分布检测 | 第39-43页 |
| ·光GFP重组质粒PYA3342-GFP的构建 | 第39-41页 |
| ·PYA3342-GFP重组质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒PYA3342-GFP转化减毒沙门氏菌X4550 | 第42页 |
| ·携带荧光GFP重组减毒沙门氏菌X4550(PYA3342-N)禽体内分布检测 | 第42-43页 |
| ·禽传染性支气管炎病毒减毒沙门氏菌疫苗制备与免疫原性研究 | 第43-45页 |
| ·减毒沙门氏菌疫苗的制备 | 第43页 |
| ·试验鸡分组及免疫 | 第43页 |
| ·样品采集 | 第43页 |
| ·抗IBV特异性抗体IgG检测 | 第43-44页 |
| ·IgA检测 | 第44页 |
| ·CD4+,CD8+T淋巴细胞亚类检测 | 第44页 |
| ·攻毒实验 | 第44-45页 |
| 4. 结果 | 第45-55页 |
| ·禽传染性支气管炎病毒减毒沙门氏菌疫苗的构建与鉴定结果 | 第45-47页 |
| ·N基因的RT-PCR扩增结果 | 第45页 |
| ·重组减毒沙门氏菌X4550(PYA3342-N)的构建及鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE和westen-blot分析结果 | 第46-47页 |
| ·重组减毒沙门氏菌体内安全性与稳定性检测结果 | 第47-48页 |
| ·荧光GFP减毒沙门氏菌X4550(PYA3342-GFP)体内分布检测结果 | 第48-50页 |
| ·荧光GFP重组减毒沙门氏菌X4550(PYA3342-GFP)的构建结果 | 第48-49页 |
| ·荧光GFP减毒沙门氏菌X4550(PYA3342-GFP)组织分布检测结果 | 第49-50页 |
| ·禽传染性支气管炎病毒减毒沙门氏菌疫苗免疫原性研究结果 | 第50-55页 |
| ·抗IBV特异性抗体IgG检测结果 | 第50-51页 |
| ·IgA检测结果 | 第51-52页 |
| ·CD4+、CD8+ T淋巴细胞亚类检测结果 | 第52-54页 |
| ·攻毒实验结果 | 第54-55页 |
| 5. 讨论 | 第55-61页 |
| ·关于目的基因N基因的选择 | 第55-56页 |
| ·关于减毒沙门氏菌X4550及相关载体PYA3342的选择 | 第56-57页 |
| ·关于目的蛋白的表达 | 第57页 |
| ·关于疫苗的安全性 | 第57-58页 |
| ·关于重组减毒沙门氏菌在禽体内的分布 | 第58-59页 |
| ·关于IGA与粘膜免疫 | 第59-60页 |
| ·减毒沙门氏菌活载体疫苗的应用前景 | 第60页 |
| ·进一步研究建议 | 第60-61页 |
| 6. 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录1: 英汉缩略名词对照表 | 第73-74页 |
| 附录2: 主要溶液的配置方法 | 第74-77页 |
| 附录3: N基因的测序结果 | 第77-78页 |
| 附录4: PYA3342质粒酶切图谱 | 第78-79页 |
| 附录5: PEGFP质粒酶切图谱 | 第79-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第80页 |
