| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-17页 |
| ·抗坏血酸的发现及作用 | 第9-11页 |
| ·抗坏血酸的发现 | 第9页 |
| ·抗坏血酸的作用 | 第9-11页 |
| ·抗坏血酸合成途径 | 第11-16页 |
| ·L-半乳糖途径 | 第12-15页 |
| ·D-半乳糖醛酸途径 | 第15页 |
| ·动物途径 | 第15页 |
| ·肌醇途径 | 第15-16页 |
| ·苹果生产在我国农业中的地位的及保健价值 | 第16页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 材料和方法 | 第17-29页 |
| ·试验材料 | 第17-18页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·菌种与载体 | 第17页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·引物的设计与合成 | 第18页 |
| ·试验方法 | 第18-29页 |
| ·总RNA 的提取 | 第18-20页 |
| ·不同提取方法的尝试 | 第18-19页 |
| ·RNA 的检测 | 第19页 |
| ·试剂配制 | 第19-20页 |
| ·GMP 基因的克隆 | 第20-23页 |
| ·第一链cDNA 合成 | 第20-21页 |
| ·GMP 基因的扩增 | 第21页 |
| ·GMP 基因扩增产物的回收 | 第21页 |
| ·GMP 基因与pMD18-T vector 的连接 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·GMP 基因重组质粒导入大肠杆菌感受态细胞 | 第22页 |
| ·GMP 基因阳性克隆的筛选和鉴定 | 第22-23页 |
| ·GMP 基因序列的测定及分析 | 第23页 |
| ·GPP 基因的克隆 | 第23页 |
| ·第一链cDNA 合成 | 第23页 |
| ·GPP 基因的扩增 | 第23页 |
| ·GPP 基因扩增产物的回收 | 第23页 |
| ·GPP 基因与pMD18-T vector 的连接 | 第23页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第23页 |
| ·GPP 基因重组质粒导入大肠杆菌感受态细胞 | 第23页 |
| ·GPP 基因阳性克隆的筛选和鉴定 | 第23页 |
| ·GPP 基因序列的测定及分析 | 第23页 |
| ·GGP 基因的克隆 | 第23-25页 |
| ·第一链cDNA 合成 | 第24页 |
| ·GGP 基因的扩增 | 第24-25页 |
| ·GGP 扩增产物的回收 | 第25页 |
| ·GGP 基因与pMD18-T vector 的连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第25页 |
| ·GGP 基因重组质粒导入大肠杆菌感受态细胞 | 第25页 |
| ·GGP 基因阳性克隆的筛选和鉴定 | 第25页 |
| ·GGP 基因序列的测定及分析 | 第25页 |
| ·ASA 含量及酶活性的测定 | 第25-26页 |
| ·AsA 和DHA 含量的测定 | 第25页 |
| ·GalLDH 活性测定 | 第25-26页 |
| ·GalDH 活性测定 | 第26页 |
| ·苹果果实ASA 合成及代谢酶基因的定量表达 | 第26-28页 |
| ·数据处理 | 第28-29页 |
| 第三章 结果与分析 | 第29-50页 |
| ·苹果叶片总RNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·GMP 基因的获得 | 第30-35页 |
| ·GMP 基因的扩增 | 第30-31页 |
| ·GMP 基因重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·GMP 基因cDNA 的测序结果 | 第32-35页 |
| ·GPP 基因的克隆 | 第35-39页 |
| ·GPP 基因的扩增 | 第35页 |
| ·GPP 基因重组质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| ·GPP 基因的序列分析 | 第36-39页 |
| ·GGP 基因的克隆 | 第39-42页 |
| ·GGP 基因的扩增 | 第39页 |
| ·GGP 基因的重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| ·GGP 基因cDNA 全长的序列测定及结果分析 | 第40-42页 |
| ·苹果果实发育过程中抗坏血酸含量相关指标的测定结果 | 第42-45页 |
| ·苹果果实发育时期抗坏血酸含量动态变化 | 第42-44页 |
| ·抗坏血酸合成的两个关键酶的活性变化 | 第44-45页 |
| ·苹果果实发育过程中抗坏血酸合成相关基因酶的定量表达 | 第45-50页 |
| ·L-半乳糖途径各合成酶基因的定量表达 | 第45-48页 |
| ·再生途径酶基因的定量表达 | 第48-49页 |
| ·D-半乳糖途径GalUR 基因的定量表达 | 第49-50页 |
| 第四章 讨论 | 第50-55页 |
| ·关于RNA 提取 | 第50-51页 |
| ·SDS-热酚法 | 第50-51页 |
| ·硼酸法 | 第51页 |
| ·CTAB 法 | 第51页 |
| ·关于PCR 扩增 | 第51页 |
| ·关于荧光定量PCR | 第51-52页 |
| ·GMP、GPP、GGP 基因克隆的意义 | 第52页 |
| ·苹果果实抗坏血酸合成相关酶定量表达 | 第52-55页 |
| 第五章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 附录 | 第64-73页 |
| 缩略词 | 第64-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |
