| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-42页 |
| ·EPSP 合酶国内外研究现状 | 第16-21页 |
| ·莽草酸途径研究 | 第16-17页 |
| ·EPSP 合酶研究史 | 第17-18页 |
| ·EPSP 合酶催化机制 | 第18页 |
| ·EPSP 合酶类型 | 第18页 |
| ·EPSP 合酶保守功能域的研究 | 第18-20页 |
| ·EPSP 合酶结构研究 | 第20-21页 |
| ·广谱灭生性除草剂草甘膦 | 第21-30页 |
| ·草甘膦 | 第21-22页 |
| ·除草剂草甘膦的作用机理 | 第22页 |
| ·草甘膦抗性获得方式 | 第22-28页 |
| ·草甘膦降解途径研究 | 第28-30页 |
| ·非靶位点抗性机制研究 | 第30页 |
| ·EPSP 合酶用于新抗菌素靶标研究 | 第30-31页 |
| ·丙酮酸转移酶家族 | 第30-31页 |
| ·EPSP 合酶抑制剂研究进展 | 第31页 |
| ·转基因植物发展现状 | 第31-35页 |
| ·国外转基因植物现状 | 第31-33页 |
| ·国内转基因植物现状 | 第33-35页 |
| ·基因芯片技术及其应用 | 第35-40页 |
| ·生物芯片技术简介 | 第35-36页 |
| ·基因芯片技术及分类 | 第36页 |
| ·基因芯片在微生物学的应用 | 第36-39页 |
| ·基因芯片在抗除草剂草甘膦作物方面的应用 | 第39-40页 |
| ·立题依据和技术路线 | 第40-42页 |
| ·立题依据 | 第40-41页 |
| ·技术路线 | 第41-42页 |
| 第二章 II 型EPSP 合酶中新保守功能域RPMXR 与酶活和抗性的分析 | 第42-67页 |
| ·材料 | 第42-46页 |
| ·菌株和质粒 | 第42-43页 |
| ·酶，试剂和试剂盒 | 第43-44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·抗生素 | 第44-45页 |
| ·常用溶液配制 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-54页 |
| ·基因组DNA、质粒DNA 的提取 | 第46-47页 |
| ·PCR 扩增和纯化 | 第47-49页 |
| ·DNA 酶切与连接反应 | 第49-50页 |
| ·感受态细胞的制备与热激转化 | 第50页 |
| ·氨基酸多序列比对 | 第50-51页 |
| ·定点突变 | 第51页 |
| ·功能互补实验及草甘膦抗性实验 | 第51页 |
| ·融合蛋白的表达与纯化 | 第51页 |
| ·变性蛋白SDS-PAGE 电泳 | 第51-52页 |
| ·总蛋白的测定 | 第52页 |
| ·EPSP 合酶动力学分析 | 第52-53页 |
| ·3D 结构模拟 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-65页 |
| ·EPSP 合酶多序列比对 | 第54-56页 |
| ·EPSP 合酶基因的克隆及载体构建 | 第56-57页 |
| ·保守位点氨基酸突变 | 第57-58页 |
| ·非保守位点X 氨基酸替换 | 第58-59页 |
| ·功能互补与草甘膦抗性 | 第59页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第59-60页 |
| ·酶底物动力学参数测定 | 第60-64页 |
| ·RPMXR 功能域的3D 结构分析 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第三章 A1501 EPSP 合酶异源表达对大肠杆菌基因表达谱的影响 | 第67-87页 |
| ·材料 | 第67-70页 |
| ·菌株与质粒 | 第67页 |
| ·培养基、耗材及主要生化试剂 | 第67-69页 |
| ·主要仪器 | 第69-70页 |
| ·方法 | 第70-72页 |
| ·菌体制备与收集 | 第70页 |
| ·细菌总RNA 的提取 | 第70-71页 |
| ·定量和检测总RNA | 第71页 |
| ·cDNA 的合成和纯化 | 第71页 |
| ·cDNA 的片段化 | 第71-72页 |
| ·cDNA 的末端标记 | 第72页 |
| ·配制杂交液 | 第72页 |
| ·芯片杂交 | 第72页 |
| ·洗脱芯片 | 第72页 |
| ·扫描芯片 | 第72页 |
| ·芯片数据分析相关网站、软件及依据 | 第72-74页 |
| ·网站和软件 | 第72-73页 |
| ·差异表达基因的判定 | 第73页 |
| ·COG 的定义与建立 | 第73-74页 |
| ·游离氨基酸测定 | 第74页 |
| ·菌体培养与收集 | 第74页 |
| ·游离氨基酸样品制备 | 第74页 |
| ·BioLog 平板分析细菌代谢底物实验 | 第74-75页 |
| ·结果 | 第75-84页 |
| ·菌体RNA 提取及纯化 | 第75页 |
| ·反转录、片段化和探针标记 | 第75页 |
| ·芯片杂交 | 第75-76页 |
| ·上调基因和下调基因的功能及分类 | 第76-81页 |
| ·游离氨基酸测定 | 第81-82页 |
| ·BioLog 细菌代谢底物分析 | 第82-83页 |
| ·丝氨酸相关基因的表达受到抑制 | 第83页 |
| ·对I 型菌毛相关基因表达的影响 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-87页 |
| 第四章 草甘膦冲击对大肠杆菌基因表达谱的影响 | 第87-101页 |
| ·材料 | 第87页 |
| ·菌株与质粒 | 第87页 |
| ·培养基、耗材及主要生化试剂 | 第87页 |
| ·主要仪器 | 第87页 |
| ·方法 | 第87-88页 |
| ·菌体制备与收集 | 第87页 |
| ·总RNA 提取 | 第87-88页 |
| ·定量和检测总RNA | 第88页 |
| ·cDNA 的合成与纯化 | 第88页 |
| ·cDNA 的片段化 | 第88页 |
| ·cDNA 的末端标记 | 第88页 |
| ·配置杂交液 | 第88页 |
| ·芯片杂交 | 第88页 |
| ·洗脱芯片 | 第88页 |
| ·扫描芯片 | 第88页 |
| ·草甘膦冲击下的生长曲线测定 | 第88页 |
| ·结果 | 第88-99页 |
| ·菌体RNA 提取及纯化 | 第88-89页 |
| ·反转录、片段化和探针标记 | 第89页 |
| ·芯片杂交 | 第89页 |
| ·上调基因和下调基因的功能及分类 | 第89-93页 |
| ·M9 限制性培养基生长曲线 | 第93-94页 |
| ·草甘膦冲击对莽草酸相关途径基因的影响 | 第94-95页 |
| ·草甘膦冲击对支链氨基酸合成的影响 | 第95页 |
| ·草甘膦冲击对亮氨酸ABC 转运蛋白的影响 | 第95-96页 |
| ·草甘膦冲击对磺酸盐利用的影响 | 第96-97页 |
| ·草甘膦冲击对I 型菌毛的影响 | 第97-98页 |
| ·草甘膦冲击对噬菌体冲击蛋白的影响 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-101页 |
| 结论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 作者简介 | 第114-115页 |