| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-29页 |
| ·狂犬病病毒的生活周期 | 第17-21页 |
| ·狂犬病病毒的受体 | 第17-18页 |
| ·细胞内摄作用 | 第18页 |
| ·胞内病毒运输 | 第18页 |
| ·复制、转录和蛋白表达 | 第18-20页 |
| ·包装和出芽 | 第20-21页 |
| ·狂犬病病毒的致病决定因子 | 第21-25页 |
| ·糖蛋白 G 和致病性 | 第21-22页 |
| ·细胞凋亡和致病性 | 第22-23页 |
| ·逆向轴突运输 | 第23-24页 |
| ·逃避宿主的先天性免疫应答 | 第24-25页 |
| ·利用基因操作技术开发新型狂犬病疫苗 | 第25-27页 |
| ·狂犬病疫苗现状 | 第25页 |
| ·新型狂犬病疫苗 | 第25-27页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 第二章 狂犬病病毒Flury LEP和Flury HEP反向遗传操作系统的建立 | 第29-42页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·病毒株 | 第29页 |
| ·小鼠和细胞 | 第29页 |
| ·质粒 | 第29页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第29-30页 |
| ·引物设计与合成 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-33页 |
| ·病毒基因组的提取、反转录和PCR | 第31页 |
| ·RT-PCR 产物的克隆 | 第31页 |
| ·基因组全长cDNA 克隆的构建 | 第31-32页 |
| ·辅助质粒的构建 | 第32页 |
| ·病毒拯救 | 第32页 |
| ·救获病毒的序列鉴定 | 第32-33页 |
| ·种毒的制备及滴定 | 第33页 |
| ·病毒生长动力学曲线的测定 | 第33页 |
| ·病毒毒力测定 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-40页 |
| ·Flury LEP 和 HEP 的基因组序列比较 | 第33-36页 |
| ·Flury LEP 和 HEP 的基因组全长cDNA 克隆和辅助质粒的构建 | 第36页 |
| ·病毒的拯救 | 第36-37页 |
| ·病毒体外生长特性 | 第37-38页 |
| ·对小鼠的致病性 | 第38-40页 |
| ·核酸序列号 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 狂犬病病毒Flury LEP分子致病机理和致弱机制的研究 | 第42-58页 |
| ·材料与方法 | 第42-46页 |
| ·病毒株及狂犬病标准血清 | 第42页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第42页 |
| ·引物设计与合成 | 第42-43页 |
| ·突变病毒、嵌合病毒全长基因组cDNA克隆的构建 | 第43页 |
| ·病毒的拯救 | 第43-44页 |
| ·救获病毒的序列鉴定 | 第44页 |
| ·种毒的制备及滴定 | 第44页 |
| ·病毒生长动力学曲线的测定 | 第44页 |
| ·病毒毒力测定 | 第44-45页 |
| ·体外传代 | 第45页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第45页 |
| ·Western blot | 第45页 |
| ·BALB/c小鼠的免疫及攻毒保护试验 | 第45页 |
| ·中和抗体滴定试验 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-55页 |
| ·G333 Arg 的替换消除了 LEP 的神经侵入能力但对成年小鼠仍能致死 | 第46页 |
| ·rLEPG333Q 在神经组织或细胞复制时的回复突变使其重新获得对小鼠的致病力 | 第46-50页 |
| ·LEP 基因组背景影响了 G333 位点 Gln 的稳定性 | 第50-51页 |
| ·L 蛋白与 G333 位点的 Gln 的稳定性密切相关 | 第51页 |
| ·G_(R333Q)突变对Flury诱导细胞凋亡能力的影响 | 第51页 |
| ·致弱毒株可诱导更强的免疫反应和保护率 | 第51-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 双表达糖蛋白基因的重组狂犬病病毒的构建及其生物学特性鉴定 | 第58-67页 |
| ·材料与方法 | 第58-61页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·引物设计与合成 | 第58页 |
| ·含有双 G 基因的基因组全长cDNA 的构建 | 第58-59页 |
| ·病毒的拯救 | 第59页 |
| ·救获病毒的序列鉴定 | 第59-60页 |
| ·种毒的制备及滴定 | 第60页 |
| ·病毒生长动力学曲线的测定 | 第60页 |
| ·病毒毒力测定 | 第60页 |
| ·体外传代 | 第60页 |
| ·Western blot 检测重组病毒 G 蛋白表达 | 第60页 |
| ·灭活疫苗的制备 | 第60页 |
| ·灭活疫苗免疫比格犬和BALB/c 小鼠 | 第60-61页 |
| ·结果 | 第61-65页 |
| ·含双G 基因的LEP 全长基因组cDNA 克隆的构建和重组病毒的拯救 | 第61-62页 |
| ·病毒体外生长特性 | 第62-63页 |
| ·对小鼠的致病性 | 第63-64页 |
| ·免疫保护试验 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 全文结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-78页 |
| 附录 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简历 | 第87页 |
