| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-20页 |
| ·LEA 蛋白研究进展 | 第13-16页 |
| ·LEA 蛋白的分类和特点 | 第13-14页 |
| ·LEA 蛋白的结构 | 第14页 |
| ·LEA 蛋白的亚细胞定位 | 第14-16页 |
| ·LEA 蛋白编码基因的表达调控 | 第16-17页 |
| ·基因表达和调节 | 第16页 |
| ·LEA 蛋白编码基因的启动子研究 | 第16-17页 |
| ·LEA 蛋白的功能 | 第17-18页 |
| ·参与蛋白稳定和分子保护 | 第17-18页 |
| ·参与离子结合和抗氧化作用 | 第18页 |
| ·参与细胞膜连接、折叠和稳定作用 | 第18页 |
| ·前景展望 | 第18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 紫花苜蓿 MsLEA3-1 基因的克隆 | 第20-26页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·菌株和试剂 | 第20页 |
| ·引物设计与合成 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-23页 |
| ·获取材料 | 第20页 |
| ·紫花苜蓿总RNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·逆转录合成第一链cDNA | 第21页 |
| ·PCR 反应 | 第21页 |
| ·PCR 产物的切胶回收 | 第21页 |
| ·PCR 产物的 T-A 克隆 | 第21-22页 |
| ·连接产物的转化 | 第22页 |
| ·挑取阳性克隆 | 第22页 |
| ·鉴定与分析 | 第22-23页 |
| ·结果与分析 | 第23-24页 |
| ·提取紫花苜蓿总RNA | 第23页 |
| ·pMD-Lea PCR 鉴定 | 第23-24页 |
| ·MsLEA3-1 基因的序列分析 | 第24页 |
| ·讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 MsLEA3-1 基因的表达分析 | 第26-30页 |
| ·实验仪器 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·材料的获取 | 第26页 |
| ·实时荧光定量检测MsLEA3-1 基因 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-28页 |
| ·MsLEA3-1 基因的组织差异性表达 | 第27页 |
| ·不同时间NaCl 胁迫下MsLEA3-1 基因的变化 | 第27-28页 |
| ·不同时间ABA 胁迫下MsLEA3-1 基因的变化 | 第28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| 第四章 MsLEA3-1 原核表达及亚细胞定位 | 第30-39页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·质粒载体 | 第30页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·溶液配制 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-34页 |
| ·重组子pET-LEA 构建 | 第31页 |
| ·重组子GFP-LEA 构建 | 第31页 |
| ·重组子pET-LEA 对E.coli 的转化 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| ·诱导表达重组子pET-LEA | 第32页 |
| ·金粉的制备 | 第32页 |
| ·DNA 子弹的制备 | 第32-33页 |
| ·洋葱表皮的准备 | 第33页 |
| ·洋葱表皮的轰击及检测 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-39页 |
| ·MsLEA3-1 基因原核表达载体pET-LEA 构建及鉴定 | 第34-35页 |
| ·MsLEA3-1 基因融合蛋白诱导表达 | 第35-36页 |
| ·MsLEA3-1 基因亚细胞定位表达载体构建及鉴定 | 第36页 |
| ·洋葱表皮细胞的轰击及荧光信号的检测 | 第36-39页 |
| 第五章 MsLEA3-1 基因超表达载体的构建及转化 | 第39-48页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·菌株和载体 | 第39页 |
| ·试剂材料 | 第39页 |
| ·溶液配制 | 第39页 |
| ·培养基的配制 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-41页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·植物表达载体构建 | 第40页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第40页 |
| ·农杆菌的转化和阳性克隆的鉴定 | 第40页 |
| ·烟草和紫花苜蓿的转化 | 第40页 |
| ·再生植株的转基因检测 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-46页 |
| ·植物表达载体构建 | 第41-42页 |
| ·重组子的鉴定 | 第42-43页 |
| ·烟草再生植株的获得 | 第43页 |
| ·苜蓿再生植株的获得 | 第43-44页 |
| ·苜蓿再生植株PCR 检测 | 第44页 |
| ·烟草再生植株检测 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第六章 MsLEA3-1 基因ihpRNA 干扰载体构建及对烟草的转化 | 第48-56页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·供试材料 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-50页 |
| ·引物设计 | 第48-49页 |
| ·MsLEA3-1 基因干扰片段的克隆和测序鉴定 | 第49-50页 |
| ·MsLEA3-1 基因ihpRNA 载体构建及鉴定 | 第50页 |
| ·农杆菌感受态的制备、转化及鉴定 | 第50页 |
| ·烟草转化 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-54页 |
| ·RNA 干扰植物表达载体构建及鉴定 | 第50-53页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第七章 转基因烟草的耐盐性评价 | 第56-62页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·植物材料 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-57页 |
| ·设计与处理 | 第56-57页 |
| ·项目测定与方法 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-61页 |
| ·转MsLEA3-1 基因烟草组培苗的耐盐性 | 第57-59页 |
| ·转基因烟草盆栽苗的耐盐性 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| 第八章 结论与展望 | 第62-63页 |
| ·结论 | 第62页 |
| ·展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |
