| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-41页 |
| ·斑马鱼及其发育过程 #I | 第16-24页 |
| ·斑马鱼的特征及模式生物地位的建立 | 第16-17页 |
| ·斑马鱼的发育 | 第17-24页 |
| ·肝脏的结构功能及发育 | 第24-35页 |
| ·肝脏的形态和结构 | 第25-27页 |
| ·肝脏的生理功能 | 第27-28页 |
| ·肝脏发育过程 | 第28-30页 |
| ·肝脏发育过程中的相关调控基因 | 第30-35页 |
| ·分泌蛋白 | 第35-39页 |
| ·分泌蛋白 | 第36-37页 |
| ·分泌蛋白的修饰 | 第37-39页 |
| ·本课题研究目的和意义 | 第39-41页 |
| 第二章 材料和方法 | 第41-64页 |
| ·斑马鱼 | 第41页 |
| ·斑马鱼谱系及饲养 | 第41页 |
| ·收集受精卵 | 第41页 |
| ·未受精卵的收集 | 第41页 |
| ·大肠杆菌菌株 | 第41页 |
| ·基因组DNA的提取及使用 | 第41-44页 |
| ·基因克隆 | 第42-43页 |
| ·聚合酶链反应(PCR) | 第42页 |
| ·PCR产物/DNA片段纯化 | 第42页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第42页 |
| ·DNA连接入质粒载体 | 第42-43页 |
| ·用热激法转化DH5α大肠杆菌制备感受态细胞 | 第43页 |
| ·DNA测序 | 第43页 |
| ·基因定点突变 | 第43-44页 |
| ·斑马鱼基因组DNA提取 | 第44页 |
| ·从成年斑马鱼中提取基因组DNA | 第44页 |
| ·从鱼卵或者鱼鳞中提取基因组DNA | 第44页 |
| ·RNA相关技术及方法 | 第44-47页 |
| ·从鱼卵中或者成鱼组织中提取总RNA | 第44-45页 |
| ·除去RNA中的基因组DNA | 第45页 |
| ·5'-RACE and 3'-RACE | 第45页 |
| ·RT-PCR (Reverse Transcription PCR) | 第45-46页 |
| ·mRNA的体外合成 | 第46页 |
| ·Northern Blot分析 | 第46-47页 |
| ·探针制备 | 第46页 |
| ·RNA样品的准备 | 第46-47页 |
| ·RNA胶电泳 | 第47页 |
| ·Northern杂交 | 第47页 |
| ·抗体免疫荧光 | 第47-48页 |
| ·抗体免疫荧光的实验流程 | 第47-48页 |
| ·p-Histone H3 Immunostaining and TUNEL Assay | 第48页 |
| ·蛋白质在大肠杆菌中表达 | 第48-49页 |
| ·制备热击转化的BL21感受态细胞 | 第48页 |
| ·蛋白表达 | 第48-49页 |
| ·蛋白纯化 | 第49页 |
| ·GST融合蛋白的纯化 | 第49页 |
| ·GST融合蛋白的透析及浓缩 | 第49页 |
| ·抗体的制备 | 第49-51页 |
| ·抗原的准备 | 第49-50页 |
| ·抗体的效价及特异性检测 | 第50页 |
| ·抗体纯化 | 第50-51页 |
| ·抗体粗纯化 | 第50页 |
| ·抗原抗体吸附纯化 | 第50-51页 |
| ·Western Blot | 第51-52页 |
| ·蛋白样品的准备 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳和转膜 | 第51-52页 |
| ·目标蛋白的信号检测 | 第52页 |
| ·显微注射 | 第52-53页 |
| ·准备显微注射的材料 | 第52页 |
| ·附件,针头和支持盘的准备 | 第52-53页 |
| ·显微注射Microinjection | 第53页 |
| ·斑马鱼胚胎的冰冻切片Cryosectioning | 第53页 |
| ·整胚原位杂交 | 第53-55页 |
| ·准备地高辛标记的RNA探针 | 第53-54页 |
| ·整胚原位杂交 | 第54-55页 |
| ·显微镜下观察和成像 | 第55页 |
| ·细胞培养和转染 | 第55-56页 |
| ·细胞培养 | 第55页 |
| ·细胞转染 | 第55-56页 |
| ·斑马鱼的组织取血及解剖 | 第56页 |
| ·斑马鱼的组织取血 | 第56页 |
| ·斑马鱼的组织解剖 | 第56页 |
| ·免疫共沉淀 | 第56-57页 |
| ·油红(Oil Red O)染色 | 第57页 |
| ·化学试剂及培养基配方 | 第57-59页 |
| ·引物及实验程序列表 | 第59-64页 |
| 第三章 斑马鱼基因组中leg1存在leg1a和leg1b两个拷贝 | 第64-73页 |
| ·引言 | 第64页 |
| ·leg1基因的定位 | 第64-65页 |
| ·leg1a和leg1b基因的结构分析及全长基因克隆 | 第65-69页 |
| ·leg1a和leg1b起始密码子ATG上游序列分析 | 第69-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 第四章 leg1基因及其蛋白序列在不同物种中的保守性分析 | 第73-76页 |
| ·Leg1蛋白的结构域及其在脊椎动物中的进化关系 | 第73-74页 |
| ·leg1的直向同源基因hleg1与mleg1的特征 | 第74-75页 |
| ·小结 | 第75-76页 |
| 第五章 leg1基因的表达谱 | 第76-85页 |
| ·leg1基因在斑马鱼胚胎不同时期的表达 | 第76-82页 |
| ·leg1基因RNA水平的表达分析 | 第76-78页 |
| ·Leg1a和Leg1b蛋白水平的分析 | 第78-81页 |
| ·Leg1抗体的制备 | 第78-80页 |
| ·胚胎期Leg1蛋白的表达分析 | 第80-81页 |
| ·胚胎期leg1a和leg1b的表达比例分析 | 第81-82页 |
| ·leg1基因在成年斑马鱼不同组织中的表达分析 | 第82-83页 |
| ·leg1在成鱼不同组织中的RNA表达特征 | 第82页 |
| ·成鱼肝脏中leg1a和leg1b的表达比例分析 | 第82-83页 |
| ·成鱼中Leg1蛋白表达特征 | 第83页 |
| ·小结 | 第83-85页 |
| 第六章 Leg1是一个新型的分泌蛋白 | 第85-91页 |
| ·Leg1蛋白的信号肽预测 | 第85页 |
| ·Leg1是一个肝脏合成的分泌蛋白 | 第85-87页 |
| ·Leg1在分泌过程中的修饰和加工 | 第87-89页 |
| ·Leg1蛋白糖基化位点的预测 | 第88页 |
| ·Leg1蛋白二硫键位点的预测 | 第88-89页 |
| ·小结 | 第89-91页 |
| 第七章 Leg1蛋白在斑马鱼胚胎发育中的功能分析 | 第91-106页 |
| ·morpholino的设计与检测 | 第91-93页 |
| ·Leg1蛋白是斑马鱼胚胎肝脏发育的必需因子 | 第93-98页 |
| ·Leg1抗体能够同时检测Leg1a和Leg1b蛋白 | 第93页 |
| ·Leg1a和Leg1b蛋白都是斑马鱼胚胎肝脏发育的必需因子 | 第93-96页 |
| ·Leg1a和Leg1b在斑马鱼胚胎肝脏发育中功能部分重叠 | 第96-98页 |
| ·Leg1功能的敲低抑制肝的生长发育而非肝芽的起始 | 第98页 |
| ·Leg1也是肠和外分泌胰腺延伸扩张的必需因子 | 第98-100页 |
| ·具有功能的Leg1必须是一个分泌型的Leg1 | 第100-101页 |
| ·leg1基因敲低抑制了肝脏细胞的增殖而致使肝脏变小 | 第101-104页 |
| ·小结 | 第104-106页 |
| 第八章 leg1基因突变体的筛选 | 第106-112页 |
| ·基因突变 | 第106页 |
| ·TILING筛选 | 第106-109页 |
| ·leg1突变体的获得 | 第109-111页 |
| ·小结 | 第111-112页 |
| 第九章 结论与讨论 | 第112-121页 |
| ·结论 | 第112页 |
| ·讨论 | 第112-121页 |
| 致谢 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-131页 |
