| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-32页 |
| ·问题的提出 | 第11页 |
| ·选题背景及意义 | 第11-12页 |
| ·文献综述 | 第12-30页 |
| ·Wnt 信号转导通路 | 第12-18页 |
| ·Wnt 信号通路在疾病发生中的作用 | 第18-19页 |
| ·自噬过程及其分子调控 | 第19-25页 |
| ·自噬的病理生理功能 | 第25-27页 |
| ·pVHL 蛋白概述 | 第27-28页 |
| ·pVHL 在信号通路中的作用 | 第28-29页 |
| ·pVHL 与疾病的关系 | 第29-30页 |
| ·研究方法 | 第30页 |
| ·论文结构安排 | 第30-32页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第32-41页 |
| ·实验材料 | 第32-34页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·溶液配制 | 第32-34页 |
| ·实验方法 | 第34-41页 |
| ·质粒构建及定点突变 | 第34-35页 |
| ·细胞培养 | 第35页 |
| ·细胞转染 | 第35页 |
| ·免疫印迹 | 第35-36页 |
| ·免疫共沉淀 | 第36页 |
| ·融合蛋白的表达纯化和体外pull-down 实验 | 第36-37页 |
| ·细胞总RNA 的提取、基因组DNA 的去除和反转录PCR | 第37-38页 |
| ·荧光定量PCR | 第38页 |
| ·Wnt 信号通路报告基因检测 | 第38页 |
| ·免疫荧光 | 第38-39页 |
| ·体内及体外泛素实验 | 第39页 |
| ·蔗糖密度梯度离心 | 第39-40页 |
| ·自噬的诱导及检测 | 第40页 |
| ·Wnt3a 条件培养基(Wnt3a CM)及对照培养基的制备 | 第40-41页 |
| 第3章 自噬促进 Dvl2 通过溶酶体降解并增强 Dvl2 泛素化 | 第41-45页 |
| ·实验结果 | 第41-43页 |
| ·Dvl 能够被自噬降解 | 第41-42页 |
| ·自噬增强Dishevelled2 的泛素化水平 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 第4章 pVHL 促进 Dvl2 的泛素化及自噬引起的降解 | 第45-56页 |
| ·实验结果 | 第45-54页 |
| ·pVHL 促进 Dvl2 的泛素化 | 第45-47页 |
| ·pVHL 和 Dvl2 结合的结构域 | 第47-51页 |
| ·pVHL 促进自噬引起的 Dvl2 的降解 | 第51-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| 第5章 pVHL 增强p62 及LC3 与Dishevelled2 的结合 | 第56-62页 |
| ·实验结果 | 第56-60页 |
| ·pVHL 增强自噬条件下 Dvl2 和 LC3 的结合 | 第56-57页 |
| ·pVHL 介导的泛素化促进 Dvl2 和 p62 的相互作用 | 第57-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| 第6章 p62 促进泛素化的Dishevelled 形成聚集体降解 | 第62-70页 |
| ·实验结果 | 第62-68页 |
| ·p62 与泛素蛋白及 Dvl2 共定位 | 第62-63页 |
| ·p62 促进 Dvl2 和 LC3 复合体形成 | 第63-64页 |
| ·p62 与 Dvl2 及 LC3 共定位 | 第64页 |
| ·p62 促进泛素化的 Dvl2 形成大的聚集体 | 第64-67页 |
| ·p62 的泛素结合能力与 Dvl2 聚集体的形成有关 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| 第7章 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第86页 |
