| 摘要 | 第12-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 前言 | 第15-39页 |
| 1 原发性肝癌 | 第15-23页 |
| 1.1 肝癌的世界分布趋势 | 第15-16页 |
| 1.2 诱发肝癌的主要因素 | 第16-19页 |
| 1.2.1 HBV诱发的肝癌 | 第17-18页 |
| 1.2.2 HCV诱发的肝癌 | 第18页 |
| 1.2.3 过度饮酒诱发的肝癌 | 第18-19页 |
| 1.2.4 NAFLD诱发的肝癌 | 第19页 |
| 1.3 肝癌的分子机制 | 第19-23页 |
| 1.3.1 Wnt/β-catenin信号转导通路 | 第20页 |
| 1.3.2 受体酪氨酸激酶途径 | 第20-21页 |
| 1.3.3 血管内皮生长因子和其他血管生成途径 | 第21页 |
| 1.3.4 JAK/STAT信号通路 | 第21-22页 |
| 1.3.5 p53信号通路 | 第22页 |
| 1.3.6 泛素蛋白酶体通路 | 第22-23页 |
| 2 糖酵解关键酶PKM2 | 第23-30页 |
| 2.1 PKM2的表达调节 | 第24-25页 |
| 2.2 PKM2的活性调节 | 第25-26页 |
| 2.3 PKM2在细胞核中的功能 | 第26-27页 |
| 2.4 PKM2与HIF-1的正反馈调节 | 第27-28页 |
| 2.5 PKM2和氧化压力调节 | 第28-29页 |
| 2.6 PKM2促进肿瘤的形成 | 第29页 |
| 2.7 PKM2是肿瘤治疗的潜在靶点 | 第29-30页 |
| 3 蛋白的SUMO化修饰 | 第30-37页 |
| 3.1 SUMO家族成员 | 第31页 |
| 3.2 SUMO化循环过程 | 第31-33页 |
| 3.3 SUMO识别和相互作用序列 | 第33-34页 |
| 3.4 SUMO的功能 | 第34-37页 |
| 3.4.1 SUMO化调控蛋白的定位 | 第34页 |
| 3.4.2 SUMO化调控转录 | 第34-35页 |
| 3.4.3 SUMO在基因组完整性和染色体中的作用 | 第35-36页 |
| 3.4.4 SUMO与健康和疾病的关系 | 第36-37页 |
| 4 本文研究的目的和意义 | 第37-39页 |
| 材料与方法 | 第39-53页 |
| 1 实验材料 | 第39-41页 |
| 1.1 细胞株 | 第39页 |
| 1.2 实验试剂及药品 | 第39-40页 |
| 1.3 实验仪器 | 第40-41页 |
| 2 实验方法 | 第41-53页 |
| 2.1 分子实验 | 第41-47页 |
| 2.1.1 载体构建 | 第41-43页 |
| 2.1.2 目的基因的扩增和shRNA的退火 | 第43-44页 |
| 2.1.3 大肠杆菌感受态制备 | 第44-45页 |
| 2.1.4 LIC连接与转化 | 第45-46页 |
| 2.1.5 质粒的提取 | 第46-47页 |
| 2.2 细胞实验 | 第47-53页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第47页 |
| 2.2.2 细胞的冻存与复苏 | 第47页 |
| 2.2.3 磷酸钙转染 | 第47-48页 |
| 2.2.4 Entranster~(TM)-D-4000转染 | 第48页 |
| 2.2.5 慢病毒感染 | 第48页 |
| 2.2.6 细胞蛋白的提取及Western Blot | 第48-49页 |
| 2.2.7 PKM2酶活的测定 | 第49页 |
| 2.2.8 免疫共沉淀 | 第49-50页 |
| 2.2.9 质膜分离 | 第50-51页 |
| 2.2.10 免疫荧光 | 第51-53页 |
| 结果与分析 | 第53-67页 |
| 1 PKM2与Ubc9相互作用 | 第53-54页 |
| 2 PKM2发生SUMO化修饰 | 第54-55页 |
| 3 PKM2发生SUMO化后定位到质膜 | 第55-61页 |
| 4 PKM2的SIM突变后不发生SUMO化 | 第61-64页 |
| 5 PKM2的SIM突变后不定位到质膜 | 第64-67页 |
| 讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
