| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 引言 | 第12-17页 |
| 1 小麦抗叶锈病的分子生物学进展 | 第12-13页 |
| 2 植物过敏性反应的研究进展 | 第13-17页 |
| 第一章 RNA 的提取和持家基因的选择 | 第17-25页 |
| 1 材料和方法 | 第18-21页 |
| ·仪器 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| ·植物材料和供试菌种 | 第18页 |
| ·试验所用引物 | 第18-19页 |
| ·试验方法 | 第19-20页 |
| ·小麦叶锈菌的扩繁 | 第19页 |
| ·试验样品的采集 | 第19-20页 |
| ·RNA 的提取及检测 | 第20页 |
| ·创造无RNA 酶的环境 | 第20页 |
| ·RNA 的提取（NaAc/无水乙醇沉淀法） | 第20页 |
| ·RNA 中基因组总DNA 的去除 | 第20页 |
| ·总RNA 纯度及完整性的检测 | 第20页 |
| ·CDNA 第一链的合成 | 第20-21页 |
| ·RT-PCR 对总RNA 质量的验证 | 第21页 |
| 2 结果与分析 | 第21-23页 |
| ·总 RNA 纯度及产量检测结果 | 第21-22页 |
| ·总 RNA 完整性检测结果 | 第22-23页 |
| ·RT-PCR 对总RNA 质量的验证 | 第23页 |
| 3 讨论 | 第23-25页 |
| ·植物总 RNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·不同持家基因的扩增 | 第24-25页 |
| 第二章 小麦过敏性诱导反应蛋白基因Ta-hir3 和Ta-hir4 的克隆及序列分析 | 第25-47页 |
| 1 材料和方法 | 第25-32页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第25页 |
| ·供试菌种和小麦品种 | 第25页 |
| ·接种与培养 | 第25-26页 |
| ·取样量与取样时间 | 第26页 |
| ·载体与菌株 | 第26页 |
| ·溶液与培养基的配制 | 第26-27页 |
| ·培养基的配制 | 第26页 |
| ·常规溶液的配制 | 第26-27页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白3 和4 基因的cDNA 克隆 | 第27-30页 |
| ·供试引物 | 第27页 |
| ·总RNA 的提取（NaAc/无水乙醇沉淀法） | 第27页 |
| ·总RNA 纯度及完整性的检测 | 第27页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第27页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白3 和4 基因的cDNA 序列扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第28页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第29页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第29-30页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白3 和4 基因的DNA 克隆 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·小麦叶片DNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白3 和4 基因的DNA 序列扩增 | 第31页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白基因3 和4 的序列分析 | 第31-32页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白3 和4 同源序列的分析 | 第31页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白3 和4 氨基酸序列的分析 | 第31-32页 |
| ·进化树分析 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-45页 |
| ·扩增模板的制备 | 第32-33页 |
| ·总RNA 纯度及产量检测结果 | 第32页 |
| ·小麦叶片基因组DNA 的提取 | 第32-33页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白基因3 和4 的CDNA 序列扩增 | 第33-35页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白基因Ta-hir3 和Ta-hir4 的DNA 序列扩增 | 第35-38页 |
| ·小麦Ta-hir3 的生物信息学分析 | 第38-42页 |
| ·Ta-hir3 氨基酸序列分析 | 第38-39页 |
| ·功能结构域分析 | 第39-40页 |
| ·Ta-hir3 基因内含子序列分析 | 第40页 |
| ·Ta-hir3 的亲缘关系分析 | 第40-42页 |
| ·小麦Ta-hir4 生物信息学分析 | 第42-45页 |
| ·小麦Ta-hir4 氨基酸序列分析 | 第42-43页 |
| ·Ta-hir4 内含子分析 | 第43-44页 |
| ·Ta-hir4 的亲缘关系分析 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| ·基因克隆 | 第45-46页 |
| ·小麦Ta-hir3 和Ta-hir4 的序列分析 | 第46-47页 |
| 第三章 小麦Ta-hir3 和Ta-hir4 的时空表达模式分析 | 第47-55页 |
| 1 材料和方法 | 第47-50页 |
| ·小麦品种与供试菌种 | 第47页 |
| ·小麦叶片总 RNA 的提取﹑纯化﹑质量检测 | 第47页 |
| ·小麦Ta-hir3 和Ta-hir4 的时空表达模式分析 | 第47-50页 |
| ·引物设计 | 第47-48页 |
| ·实时定量PCR 扩增 | 第48页 |
| ·仪器操作流程 | 第48-49页 |
| ·标准曲线的制备 | 第49页 |
| ·样品的荧光定量分析 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-52页 |
| ·小麦GAPDH 标准曲线的制作 | 第50页 |
| ·小麦Ta-hir3 标准曲线的制作 | 第50-51页 |
| ·小麦 Ta-hir4 标准曲线的制作 | 第51页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白基因 Ta-hir3 的定量分析 | 第51页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白基因 Ta-hir4 的定量分析 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| ·关于实时定量 | 第52-53页 |
| ·持家基因的选择 | 第53页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白基因的表达模式分析 | 第53-55页 |
| 第四章 小麦Ta-hir3 和Ta-hir4 的原核表达与抗体制备 | 第55-73页 |
| 1 材料与方法 | 第55-64页 |
| ·菌株与质粒 | 第55页 |
| ·仪器和试剂 | 第55-56页 |
| ·试验所需试剂的配制 | 第56-58页 |
| ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳所用试剂 | 第56-57页 |
| ·蛋白纯化所用试剂 | 第57页 |
| ·提取小麦叶片蛋白所用试剂 | 第57页 |
| ·Western 杂交所用试剂 | 第57-58页 |
| ·试验方法 | 第58-64页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）的制备 | 第58页 |
| ·原核表达载体pET-30a（+）的扩繁 | 第58页 |
| ·小麦过敏性诱导反应蛋白基因Ta-hir3 和Ta-hir4 开放阅读框的扩增 | 第58-60页 |
| ·融合表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第61页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测 | 第61-62页 |
| ·融合蛋白的大量纯化及抗体的制备 | 第62-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-71页 |
| ·小麦 Ta-hir3 和Ta-hir4 ORF 的获得及验证 | 第64-65页 |
| ·融合表达载体的构建 | 第65-66页 |
| ·IPTG 诱导浓度对小麦Ta-hir3 和Ta-hir4 基因表达的影响 | 第66-67页 |
| ·诱导时间对小麦Ta-hir3 和Ta-hir4 基因表达的影响 | 第67-68页 |
| ·重组蛋白HIR3-PET-30a(+)和HIR4-PET-30a(+)的纯化 | 第68-69页 |
| ·小麦Ta-hir3 和Ta-hir4 抗体特异性检测 | 第69-71页 |
| 3 讨论 | 第71-73页 |
| ·原核表达系统的选择 | 第71页 |
| ·表达条件的优化 | 第71-72页 |
| ·多克隆抗体的检测 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 在读期间已发表论文 | 第82-83页 |
| 作者简历 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
