| 缩略表 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 第一部分:两种蜘蛛多肽毒素酵母双杂交诱饵载体构建及初步鉴定 | 第15-51页 |
| 前言 | 第15-27页 |
| 1 蜘蛛毒素及研究意义 | 第16-19页 |
| 2 酵母双杂交系统 | 第19-27页 |
| 第一章 毒素诱饵载体的构建 | 第27-38页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27-28页 |
| ·常用缓冲溶液与其他试剂的配制 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-35页 |
| ·CaCl_2制备大肠杆菌感受态 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌转化步骤 | 第29-30页 |
| ·PCR引物的设计与合成(引物合成表) | 第30页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第30-31页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第31-32页 |
| ·PCR产物双酶切及回收 | 第32-33页 |
| ·pGBKT7载体双酶切以及产物回收 | 第33页 |
| ·毒素目的片段连入载体pGBKT7 | 第33-34页 |
| ·连接产物转入大肠杆菌TOP10 | 第34-35页 |
| ·结果 | 第35-38页 |
| ·合成的HWTX-Ⅸ与JZTX-Ⅲ引物 | 第35页 |
| ·PCR产物的电泳图,菌落PCR刷选阳性克隆电泳图 | 第35页 |
| ·载体自连图 | 第35-36页 |
| ·构建的载体部分测序图,CDS部分测序图 | 第36-38页 |
| 第二章 酵母双杂交实验 | 第38-46页 |
| ·材料与试剂 | 第38-40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·酵母菌株贮存和复苏 | 第40页 |
| ·AH109菌株表型验证 | 第40页 |
| ·酵母AH109感受态细胞的制备以及转化 | 第40-41页 |
| ·质粒快速转入酵母菌方法 | 第41-42页 |
| ·Bait毒性检测与自激活检测 | 第42页 |
| ·β-半乳糖苷酶滤纸法检测报告基因LacZ | 第42-43页 |
| ·Bait融合蛋白对酵母菌的毒性检测 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-46页 |
| ·AH109表型检测结果 | 第43-44页 |
| ·毒性和自激活检测 | 第44-46页 |
| 第三章 讨论 | 第46-51页 |
| ·关于MATCHMAKER GL4 Two-Hybrid System 3 | 第47-49页 |
| ·酵母菌株AH109 | 第48页 |
| ·X-α-gal分析 | 第48-49页 |
| ·系统3的pGBKT7和pGADT7质粒 | 第49页 |
| ·酵母菌AH109感受态 | 第49-51页 |
| 第二部分:钠离子通道嵌合体的构建以及生理活性的检测 | 第51-75页 |
| 前言 | 第51-56页 |
| 1 电压门控钠通道 | 第52-54页 |
| 2 研究思路 | 第54-56页 |
| 第一章 离子通道嵌合体的构建 | 第56-66页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-61页 |
| ·PCR引物的设计与合成(引物合成表)见附表 | 第57页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第57-58页 |
| ·PCR产物回收以及3端加一个dATP | 第58页 |
| ·凝胶回收片段 | 第58-59页 |
| ·连接得到pMD18-T-A,pMD18-T-B | 第59-60页 |
| ·目的片段组合连入pcDNA3.1(+) | 第60-61页 |
| ·实验结果 | 第61-66页 |
| ·PCR制备片段 | 第61-62页 |
| ·质粒菌落PCR筛选重组质粒 | 第62-63页 |
| ·质粒PMD18-T-A酶切产物胶回收 | 第63页 |
| ·pcDNA3.1-AB鉴定 | 第63-66页 |
| 第二章 嵌合体在哺乳动物细胞中的功能表达研究 | 第66-72页 |
| ·材料与方法 | 第66-67页 |
| ·细胞株 | 第66页 |
| ·药品和试剂 | 第66页 |
| ·仪器 | 第66页 |
| ·溶液配制 | 第66-67页 |
| ·实验方法 | 第67-69页 |
| ·细胞培养 | 第67页 |
| ·全细胞膜片钳记录 | 第67-69页 |
| ·记录参数 | 第69页 |
| ·结果 | 第69-72页 |
| 第三章 讨论 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 附录 | 第82-83页 |
| 附表 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
