| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-36页 |
| 1 杀菌/通透性增加蛋白的研究进展 | 第13-19页 |
| ·引言 | 第13页 |
| ·BPI的发现与分布 | 第13-14页 |
| ·BPI的分子结构及作用机理 | 第14-15页 |
| ·BPI的生理功能 | 第15-18页 |
| ·BPI的应用前景 | 第18-19页 |
| 2 动物防御素的研究进展 | 第19-34页 |
| ·引言 | 第19页 |
| ·防御素的种类和分布 | 第19-24页 |
| ·动物防御素的分子结构特征 | 第24-27页 |
| ·动物防御素基因的染色体定位及其表达调控 | 第27-28页 |
| ·防御素的生理功能及作用机制 | 第28-32页 |
| ·防御素的应用前景 | 第32-34页 |
| 3 目的与意义 | 第34-36页 |
| 第二部分 试验部分 | 第36页 |
| 试验Ⅰ. 荷斯坦奶牛BPI基因的克隆 | 第36-49页 |
| 1 试验材料 | 第36-39页 |
| ·试验材料的来源 | 第36页 |
| ·限制性内切酶 | 第36-37页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第37-38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38-39页 |
| 2 试验方法 | 第39-45页 |
| ·荷斯坦奶牛血液白细胞总RNA的提取 | 第39页 |
| ·总RNA的检测 | 第39-40页 |
| ·总RNA的纯化 | 第40页 |
| ·反转录 | 第40-41页 |
| ·cDNA看家基因的检测 | 第41页 |
| ·BPI基因的PCR扩增 | 第41-43页 |
| ·pEASY-T1-BPI克隆质粒的构建 | 第43-45页 |
| 3 试验结果 | 第45-48页 |
| ·荷斯坦牛血液白细胞总RNA提取 | 第45页 |
| ·反转录检测 | 第45页 |
| ·BPI扩增产物 | 第45-47页 |
| ·pEASY-T1-BPI质粒的提取 | 第47页 |
| ·pEASY-T1-BPI质粒的双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·pEASY-T1-BPI质粒测序结果 | 第48页 |
| 4 小结 | 第48-49页 |
| 试验Ⅱ. 荷斯坦牛BNBD4基因的克隆 | 第49-54页 |
| 1 试验材料 | 第49页 |
| 2 试验方法 | 第49-51页 |
| ·BNBD4基因的PCR扩增 | 第49-50页 |
| ·pBluescript-BNBD4克隆质粒的构建 | 第50-51页 |
| 3 试验结果 | 第51-53页 |
| ·BNBD4扩增产物 | 第51页 |
| ·pBluescript-BNBD4质粒的提取 | 第51-52页 |
| ·pBluescrpt-BNBD4质粒的双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·pBluescript-BNBD4质粒测序结果 | 第53页 |
| 4 小结 | 第53-54页 |
| 试验Ⅲ. pET-BPI-BNBD4融合表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达、纯化和活性试验 | 第54-76页 |
| 1 试验材料 | 第54-56页 |
| ·质粒和菌株 | 第54页 |
| ·限制性内切酶 | 第54页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第54-55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55-56页 |
| 2 试验方法 | 第56-63页 |
| ·pEASY-T1-BPI和pBluescript-BNBD4质粒的双酶切及其产物的回收 | 第56-57页 |
| ·表达载体pET-28a(+)的线性化及其双酶切产物的回收 | 第57页 |
| ·重组质粒pET-BPI的构建 | 第57-58页 |
| ·重组质粒pET-BPI的线性化及其双酶切产物的回收 | 第58页 |
| ·融合质粒pET-BPI-BNBD4的构建 | 第58-60页 |
| ·融合质粒pET-BPI-BNBD4在大肠杆菌中的诱导表达 | 第60-62页 |
| ·融合蛋白体外活性试验 | 第62-63页 |
| 3 试验结果 | 第63-75页 |
| ·pEASY-T1-BPI和pBluescript-BNBD4质粒的双酶切及其产物的回收 | 第63页 |
| ·表达载体pET-28a(+)的线性化 | 第63-64页 |
| ·重组质粒pET-BPI的提取 | 第64-65页 |
| ·重组质粒pET-BPI测序结果 | 第65页 |
| ·重组质粒pET-BPI的线性化 | 第65页 |
| ·融合质粒pET-BPI-BNBD4的提取 | 第65-66页 |
| ·融合质粒pET-BPI-BNBD4双酶切鉴定 | 第66-67页 |
| ·融合质粒pET-BPI-BNBD4测序图 | 第67-68页 |
| ·融合蛋白的SDS-PAGE检测 | 第68-69页 |
| ·融合蛋白的Western blot鉴定 | 第69页 |
| ·融合蛋白的生物信息学分析 | 第69-73页 |
| ·融合蛋白体外活性试验 | 第73-75页 |
| 4 小结 | 第75-76页 |
| 讨论 | 第76-82页 |
| 1 基因的扩增 | 第76页 |
| 2 融合表达载体的构建 | 第76-77页 |
| 3 融合蛋白的表达 | 第77-78页 |
| 4 融合蛋白的生物信息学分析 | 第78页 |
| 5 融合蛋白体外活性试验 | 第78-82页 |
| 总结 | 第82-83页 |
| 1 已做工作总结 | 第82页 |
| 2 下一步工作计划 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 附录 | 第92-101页 |
