| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 综述 | 第10-17页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 p53 的蛋白结构 | 第10页 |
| 1.3 p53 的生理功能 | 第10-11页 |
| 1.4 p53 突变的类型及常见形式 | 第11页 |
| 1.5 p53 突变的影响 | 第11-12页 |
| 1.6 p53与RNF20/40 复合体的作用机制 | 第12页 |
| 1.7 RNF20/40/WAC复合体调控p53 靶基因转录的机制 | 第12-14页 |
| 1.8 组蛋白的修饰作用 | 第14-15页 |
| 1.9 p53 与癌症 | 第15-16页 |
| 1.9.1 p53 与乳腺癌 | 第15页 |
| 1.9.2 p53 与其他癌症的关系 | 第15-16页 |
| 1.10 总结与展望 | 第16-17页 |
| 第二章 鉴定RNF20/40与p53 相互作用的关键区域 | 第17-31页 |
| 2.1 前言 | 第17页 |
| 2.2 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.2.1 实验用品与仪器 | 第17-18页 |
| 2.2.2 实验所需的细胞系 | 第18页 |
| 2.2.3 实验试剂的购买与配制 | 第18-19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-26页 |
| 2.3.1 构建含有HA标签的RNF20、RNF40和p53 的缺失突变体 | 第19页 |
| 2.3.2 真核表达质粒pCDNA3.1-HA-p53 的点突变的构建 | 第19-22页 |
| 2.3.3 细胞培养 | 第22-23页 |
| 2.3.4 质粒转染细胞 | 第23页 |
| 2.3.5 免疫共沉淀验证HA-RNF40的D1-D14 缺失突变体与p53 的相互作用 | 第23-25页 |
| 2.3.6 免疫共沉淀验证HA-RNF20的D1-D8 缺失突变体与p53 的相互作用 | 第25页 |
| 2.3.7 免疫共沉淀验证HA-p53的D1-D5 缺失突变体与RNF40 的相互作用 | 第25页 |
| 2.3.8 免疫共沉淀验证pCDNA3.1-HA-p53 点突变与RNF20 的相互作用 | 第25-26页 |
| 2.4 实验结果 | 第26-30页 |
| 2.4.1 免疫共沉淀检测RNF40与p53 相互作用的区域 | 第26-27页 |
| 2.4.2 免疫共沉淀检测RNF20与p53 相互作用的区域 | 第27页 |
| 2.4.3 免疫共沉淀检测p53与RNF40 相互作用的区域 | 第27-28页 |
| 2.4.4 p53与RNF20 相互作用的关键位点是R282W | 第28-30页 |
| 2.5 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 p53与MDM2 相互作用的关键位点 | 第31-34页 |
| 3.1 前言 | 第31页 |
| 3.2 实验用品和实验仪器 | 第31-32页 |
| 3.3 实验方法 | 第32页 |
| 3.4 实验结果 | 第32-33页 |
| 3.4.1 免疫共沉淀检测p53与MDM2 的相互作用 | 第32-33页 |
| 3.5 讨论 | 第33-34页 |
| 第4章 免疫荧光染色鉴定p53 突变对细胞定位的影响 | 第34-38页 |
| 4.1 引言 | 第34页 |
| 4.2 实验材料与试剂 | 第34页 |
| 4.3 实验耗材与仪器 | 第34-35页 |
| 4.4 实验方法 | 第35-36页 |
| 4.5 实验结果 | 第36-37页 |
| 4.6 讨论 | 第37-38页 |
| 第5章 p53 突变对其靶基因调控的影响 | 第38-47页 |
| 5.1 前言 | 第38-39页 |
| 5.2 实验材料与试剂 | 第39页 |
| 5.3 实验耗材与仪器 | 第39页 |
| 5.4 实验方法 | 第39-45页 |
| 5.4.1 引物设计 | 第39-40页 |
| 5.4.2 HCT116 p53 WT和 HCT116(p53~(-/-))两种细胞株的培养 | 第40-45页 |
| 5.5 讨论 | 第45-47页 |
| 第六章 DNA损伤药物对p53 稳定性及p53 乙酰化水平的影响 | 第47-52页 |
| 6.1 前言 | 第47-48页 |
| 6.2 实验材料 | 第48页 |
| 6.3 实验方法 | 第48-49页 |
| 6.4 实验结果 | 第49-51页 |
| 6.4.1 HCT116 细胞经药物DOX或VP16 处理后,p53 蛋白的表达量逐渐增强。RNF20~(-/-)或RNF40~(-/-)的细胞p53 蛋白表达量降低 | 第49-50页 |
| 6.4.2 HCT116 细胞经CHX处理之后,RNF20~(-/-)降低了p53-k382 处的乙酰化水平 | 第50-51页 |
| 6.5 讨论 | 第51-52页 |
| 第七章 总结与展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
