| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 GPCR简介 | 第13页 |
| 1.2 GPCR的分类 | 第13-14页 |
| 1.3 GPCR的信号通路 | 第14-16页 |
| 1.4 GPCR的结构研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5 GPCR的结构特点 | 第17-18页 |
| 1.6 GPCR的结构研究意义 | 第18-21页 |
| 第2章 胰高血糖素受体 | 第21-33页 |
| 2.1 Class B GPCR | 第21-28页 |
| 2.1.1 Class B GPCR分类 | 第21-22页 |
| 2.1.2 Class B GPCR的结构特点及研究 | 第22-24页 |
| 2.1.3 Class B GPCR与小分子配体的结合模式 | 第24-25页 |
| 2.1.4 Class B GPCR与肽类配体的结合模式 | 第25-27页 |
| 2.1.5 Class B GPCR与G蛋白的结合模式 | 第27-28页 |
| 2.2 胰高血糖素受体的发现及信号通路 | 第28-29页 |
| 2.3 胰高血糖素受体的生理功能 | 第29-30页 |
| 2.4 以胰高血糖素受体为靶点的药物研发 | 第30-31页 |
| 2.5 胰高血糖素受体的结构研究及意义 | 第31-33页 |
| 第3章 实验材料和方法 | 第33-51页 |
| 3.1 实验试剂和仪器 | 第33-37页 |
| 3.1.1 分子克隆实验试剂及耗材 | 第33页 |
| 3.1.2 蛋白质纯化所需试剂及耗材 | 第33-34页 |
| 3.1.3 结晶实验所需试剂及耗材 | 第34页 |
| 3.1.4 常用溶液配方 | 第34-36页 |
| 3.1.5 实验仪器 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-51页 |
| 3.2.1 表达载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.2.2 蓝白斑筛选及细胞表达 | 第39-41页 |
| 3.2.3 蛋白纯化 | 第41-46页 |
| 3.2.4 大量结晶实验 | 第46-47页 |
| 3.2.5 荧光漂白恢复试验（FRAP） | 第47-48页 |
| 3.2.6 自由电子激光 | 第48页 |
| 3.2.7 冷冻电镜技术 | 第48-51页 |
| 第4章 胰高血糖素受体与小分子拮抗剂及抗体复合物研究 | 第51-75页 |
| 4.1 表达载体的优化和筛选 | 第51-54页 |
| 4.2 小分子拮抗剂的筛选 | 第54-56页 |
| 4.3 特异性抗体片段的筛选 | 第56页 |
| 4.4 结晶实验 | 第56-60页 |
| 4.4.1 GCGR-NNC0640-mAb1结晶筛选 | 第56-59页 |
| 4.4.2 GCGR-NNC0640-mAb23结晶筛选 | 第59-60页 |
| 4.5 衍射数据处理及数据分析 | 第60-62页 |
| 4.6 结构分析 | 第62-75页 |
| 4.6.1 GCGR全长蛋白结构 | 第62-63页 |
| 4.6.2 与NNC0640的结合模式 | 第63-65页 |
| 4.6.3 ECD与TMD的连接肽（stalk）与ECL1的构象 | 第65-67页 |
| 4.6.4 氢氘交换实验 | 第67-68页 |
| 4.6.5 stalk-ECL1交联实验 | 第68-70页 |
| 4.6.6 GCGR构象状态 | 第70-75页 |
| 第5章 GCGR与G蛋白复合物研究 | 第75-103页 |
| 5.1 NB35和G_s蛋白纯化 | 第75-81页 |
| 5.1.1 纳米抗体纯化 | 第75-78页 |
| 5.1.2 G_s蛋白纯化 | 第78-81页 |
| 5.2 GCGR-G_s复合物的形成 | 第81-84页 |
| 5.3 GCGR-G_s复合物优化 | 第84-90页 |
| 5.3.1 纯化条件的优化 | 第84-88页 |
| 5.3.2 表达载体的优化 | 第88-90页 |
| 5.4 配体的筛选 | 第90-91页 |
| 5.5 中量实验和大量结晶实验 | 第91-96页 |
| 5.6 电镜实验结果 | 第96-103页 |
| 5.6.1 负染实验 | 第96-99页 |
| 5.6.2 Talos 200KV实验 | 第99-100页 |
| 5.6.3 Titan 300KV数据收集 | 第100-103页 |
| 第6章 讨论与展望 | 第103-107页 |
| 参考文献 | 第107-115页 |
| 附录 基因序列及蛋白序列 | 第115-121页 |
| 致谢 | 第121-123页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第123页 |
