| 摘要 | 第12-13页 |
| ABSTRACT | 第13页 |
| 第一章 前言 | 第14-36页 |
| 1.1 微小RNA | 第14-19页 |
| 1.1.1 微小RNA的概述 | 第14-16页 |
| 1.1.2 微小RNA的生物合成 | 第16-17页 |
| 1.1.3 微小RNA的功能 | 第17-19页 |
| 1.1.3.1 微小RNA与肿瘤 | 第17-18页 |
| 1.1.3.2 癌症有关的微小RNA | 第18-19页 |
| 1.1.3.3 miRNAs,生长,分化和疾病 | 第19页 |
| 1.2 核糖核酸内切酶Dicer | 第19-24页 |
| 1.2.1 概述 | 第19-21页 |
| 1.2.2 Dicer的种类及功能 | 第21-24页 |
| 1.2.2.1 拟南芥和水稻中DCL的功能 | 第21-22页 |
| 1.2.2.2 果蝇中Dicer的功能 | 第22-23页 |
| 1.2.2.3 人和小鼠Dicer的功能 | 第23-24页 |
| 1.3 FoxO的研究进展 | 第24-34页 |
| 1.3.1 FoxO蛋白的概述 | 第24-25页 |
| 1.3.2 FoxO3蛋白的结构 | 第25-26页 |
| 1.3.3 FoxO3蛋白表达及翻译后修饰 | 第26-31页 |
| 1.3.3.1 FoxO3的转录调控 | 第27页 |
| 1.3.3.2 FoxO3的磷酸化修饰 | 第27-29页 |
| 1.3.3.3 FoxO3的乙酰化修饰 | 第29-30页 |
| 1.3.3.4 FoxO3的泛素化修饰 | 第30-31页 |
| 1.3.3.5 FoxO3的赖氨酸甲基化 | 第31页 |
| 1.3.4 FoxO3的生物学功能 | 第31-34页 |
| 1.3.4.1 FoxO3和细胞周期调控 | 第32页 |
| 1.3.4.2 FoxO3和细胞增殖与凋亡 | 第32页 |
| 1.3.4.3 FoxO3和细胞分化 | 第32-33页 |
| 1.3.4.4 FoxO3和DNA损伤修复 | 第33页 |
| 1.3.4.5 FoxO3和抗氧化应答 | 第33页 |
| 1.3.4.6 FoxO3和细胞代谢 | 第33-34页 |
| 1.3.4.7 FoxO3和细胞自噬 | 第34页 |
| 1.4 立题背景 | 第34-36页 |
| 第二章 材料和方法 | 第36-68页 |
| 2.1 材料 | 第36-43页 |
| 2.1.1 质粒载体 | 第36-39页 |
| 2.1.1.1 pcDNA3.1-N-HA载体 | 第36-37页 |
| 2.1.1.2 pGL3 basic载体 | 第37-38页 |
| 2.1.1.3 pLV-H1-EF1α-puromycin/blasticidin载体 | 第38页 |
| 2.1.1.4 pLVX-IRES-Neo载体 | 第38-39页 |
| 2.1.2 菌株 | 第39页 |
| 2.1.3 细胞系 | 第39页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第39-41页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第41-43页 |
| 2.2 DNA相关实验 | 第43-55页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43-45页 |
| 2.2.2 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第45页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶中回收DNA | 第45页 |
| 2.2.4 DNA目的片段的连接和转化 | 第45-46页 |
| 2.2.5 质粒DNA的提取 | 第46-48页 |
| 2.2.5.1 质粒小量提取 | 第46-47页 |
| 2.2.5.2 质粒大提 | 第47-48页 |
| 2.2.6 PCR相关实验 | 第48-51页 |
| 2.2.6.1 一般常规PCR反应: | 第48-50页 |
| 2.2.6.2 基因的定点突变 | 第50-51页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR | 第51-53页 |
| 2.2.7.1 RNA的提取 | 第51页 |
| 2.2.7.2 RNA的逆转录 | 第51-52页 |
| 2.2.7.3 实时定量PCR | 第52-53页 |
| 2.2.8 RNA干扰载体的构建 | 第53-55页 |
| 2.3 蛋白相关实验 | 第55-63页 |
| 2.3.1 全细胞裂解液的制备 | 第55-56页 |
| 2.3.2 蛋白浓度测量(BCA法) | 第56-57页 |
| 2.3.3 蛋白质免疫印迹 | 第57-58页 |
| 2.3.4 荧光素酶活性分析 | 第58-61页 |
| 2.3.5 染色质免疫共沉淀 | 第61-63页 |
| 2.4 细胞培养及相关实验 | 第63-67页 |
| 2.4.1 细胞培养 | 第63-64页 |
| 2.4.2 细胞传代 | 第64-65页 |
| 2.4.3 细胞转染 | 第65-66页 |
| 2.4.3.1 磷酸钙瞬时转染 | 第65页 |
| 2.4.3.2 X-tremegene HD转染 | 第65-66页 |
| 2.4.3.3 脂质体转染 | 第66页 |
| 2.4.4 慢病毒介导的RNA干扰 | 第66-67页 |
| 2.4.4.1 慢病毒包装 | 第66-67页 |
| 2.4.4.2 慢病毒感染 | 第67页 |
| 2.5 数据统计分析 | 第67-68页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第68-97页 |
| 3.1 结果 | 第68-83页 |
| 3.1.1 FoxO3的沉默失活能够下调Dicer的表达 | 第68-71页 |
| 3.1.2 FoxO3对Dicer的调控是特异性的 | 第71-72页 |
| 3.1.3 FoxO3转录调控Dicer | 第72-76页 |
| 3.1.4 FoxO3通过转录调控Dicer参与miRNA的生物合成 | 第76-79页 |
| 3.1.5 FoxO3调控Dicer介导的肿瘤转移 | 第79-83页 |
| 3.2 讨论 | 第83-97页 |
| 参考文献 | 第97-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
