| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 第一部分 去泛素化酶USP21稳定MEK2促进肝癌进展的分子机制研究 | 第13-51页 |
| 1 研究背景 | 第13-28页 |
| 1.1 肝癌 | 第13-23页 |
| 1.1.1 肝癌概述 | 第13-14页 |
| 1.1.2 肝癌的诱发因素 | 第14-15页 |
| 1.1.3 肝癌的发生过程和分子机制 | 第15-19页 |
| 1.1.4 肝癌的预防和治疗 | 第19-23页 |
| 1.2 蛋白翻译后修饰 | 第23-28页 |
| 1.2.1 翻译后修饰概述 | 第23页 |
| 1.2.2 泛素化修饰 | 第23-25页 |
| 1.2.3 去泛素酶 | 第25页 |
| 1.2.4 去泛素化酶与肿瘤 | 第25-28页 |
| 2 实验材料与方法 | 第28-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 实验仪器设备 | 第28页 |
| 2.1.2 实验试剂和耗材 | 第28-30页 |
| 2.1.3 质粒、菌株、细胞系和肝癌组织样品 | 第30页 |
| 2.1.4 本研究所用引物 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-38页 |
| 2.2.1 质粒构建和制备 | 第31页 |
| 2.2.2 组织或细胞中总RNA提取 | 第31页 |
| 2.2.3 反转录和实时定量PCR反应 | 第31-32页 |
| 2.2.4 提取细胞总蛋白及定量 | 第32-33页 |
| 2.2.5 免疫印迹实验 | 第33-34页 |
| 2.2.6 考马斯亮蓝染色 | 第34页 |
| 2.2.7 免疫沉淀实验 | 第34-35页 |
| 2.2.8 USP21 KO细胞系的制备 | 第35页 |
| 2.2.9 软琼脂克隆形成与平板克隆形成实验 | 第35-36页 |
| 2.2.10 MTT实验 | 第36页 |
| 2.2.11 肿瘤移植实验 | 第36-37页 |
| 2.2.12 组学分析和数据处理 | 第37-38页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第38-51页 |
| 3.1 USP21在肝癌中高表达 | 第38-39页 |
| 3.2 过表达USP21促进肝癌细胞生长和转化 | 第39-41页 |
| 3.3 抑制USP21抑制肝癌细胞生长和转化 | 第41-44页 |
| 3.4 USP21与MEK2相互作用 | 第44-46页 |
| 3.5 USP21正调控MEK2的蛋白稳定性 | 第46-47页 |
| 3.6 USP21促进MEK2去泛素化 | 第47-48页 |
| 3.7 USP21促进Erk1/2磷酸化 | 第48-49页 |
| 3.8 讨论 | 第49-50页 |
| 3.9 总结和展望 | 第50-51页 |
| 第二部分 miR-215异常激活抑制Dicer1从而促进肝癌细胞的迁移和转化 | 第51-79页 |
| 1 研究背景 | 第51-63页 |
| 1.1 miRNA概述 | 第51页 |
| 1.2 miRNA生物合成 | 第51-52页 |
| 1.3 miRNA作用机制 | 第52-53页 |
| 1.4 miRNA与肿瘤 | 第53-61页 |
| 1.4.1 miRNA在肿瘤中整体表达是下调的 | 第54页 |
| 1.4.2 miRNA在肿瘤中异常表达的机制 | 第54-57页 |
| 1.4.3 靶基因逃避miRNA抑制调控的机制 | 第57页 |
| 1.4.4 miRNA调控肿瘤相关关键通路 | 第57-59页 |
| 1.4.5 miRNA与肿瘤诊断和治疗 | 第59-61页 |
| 1.5 miRNA与肝癌 | 第61-63页 |
| 1.5.1 肝癌中高表达的miRNA | 第61-62页 |
| 1.5.2 肝癌中低表达的miRNA | 第62-63页 |
| 2 实验材料与方法 | 第63-66页 |
| 2.1 实验材料 | 第63-64页 |
| 2.1.1 质粒、菌株、细胞系和肝癌组织样品 | 第63页 |
| 2.1.2 化学合成的siRNA及抑制剂 | 第63页 |
| 2.1.3 本研究所用引物 | 第63-64页 |
| 2.1.4 本研究使用抗体 | 第64页 |
| 2.1.5 生物信息分析所用网站 | 第64页 |
| 2.2 实验方法 | 第64-66页 |
| 2.2.1 细胞基因组DNA提取 | 第64-65页 |
| 2.2.2 亚硫酸氢钠修饰基因组DNA | 第65页 |
| 2.2.3 甲基化PCR | 第65页 |
| 2.2.4 细胞划痕创伤愈合实验 | 第65-66页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第66-79页 |
| 3.1 miR-215在肝癌细胞中高表达 | 第66-69页 |
| 3.2 miR-215在正常肝细胞中高度甲基化 | 第69页 |
| 3.3 过表达miR-215对肝癌细胞恶性表型具有促进作用 | 第69-70页 |
| 3.4 抑制内源miR-215表达对肝癌细胞恶性表型具有抑制作用 | 第70-72页 |
| 3.5 miR-215直接靶向并调控Dicer1的表达 | 第72-73页 |
| 3.6 miR-215抑制内源性Dicer1表达 | 第73-74页 |
| 3.7 抑制Dicer1对肝癌细胞恶性表型具有促进作用 | 第74-75页 |
| 3.8 miR-215调控Dicer1及其下游miRNAs的表达 | 第75-77页 |
| 3.9 讨论 | 第77-78页 |
| 3.10 总结与展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-100页 |
| 缩略词表 | 第100-101页 |
| 作者简介 | 第101-102页 |
| 研究生期间发表论文 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
