| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩写词表 | 第10-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 FAM76B研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2 MDFIC分子结构及分布 | 第13-14页 |
| 1.2.1 MDFIC分子结构及基因定位 | 第13页 |
| 1.2.2 MDFIC的细胞内定位 | 第13页 |
| 1.2.3 MDFIC的组织分布 | 第13-14页 |
| 1.3 MDFIC功能研究现状 | 第14-16页 |
| 1.3.1 MDIFC与病毒基因表达 | 第14-15页 |
| 1.3.2 MDFIC与细胞凋亡 | 第15页 |
| 1.3.3 MDFIC与细胞分化 | 第15-16页 |
| 1.4 课题研究意义 | 第16-18页 |
| 1.5 技术路线 | 第18-20页 |
| 1.5.1 酵母双杂交筛选与FAM76B相互作用的分子 | 第18-19页 |
| 1.5.2 FAM76B与MDFIC分子间相互作用的验证 | 第19页 |
| 1.5.3 MDFIC与FAM76B细胞功能的研究 | 第19-20页 |
| 第2章 酵母双杂交筛选与FAM76B相互作用的蛋白 | 第20-32页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第20-24页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第21-23页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 pGBKT7/FAM76B酵母双杂交诱饵载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.2 cDNA文库质粒的转化和FAM76B相互作用分子的酵母双杂交筛选 | 第25-28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-30页 |
| 2.3.1 pGBKT7/FAM76B酵母诱饵载体质粒的构建与鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.2 共转化子的高严谨性筛选及阳性克隆的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.3 候选阳性克隆的测序结果 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第3章 MDFIC与FAM76B相互作用的验证 | 第32-62页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 实验细胞及载体 | 第32页 |
| 3.1.2 实验试剂和仪器 | 第32-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-48页 |
| 3.2.1 MDFIC基因的克隆及相关载体的构建 | 第34-37页 |
| 3.2.2 酵母双杂交分析MDFIC与FAM76B相互作用 | 第37-38页 |
| 3.2.3 酵母双杂交分析MDFIC与FAM76B相互作用部位 | 第38-42页 |
| 3.2.4 MDFIC与FAM76B在细胞内定位的初步分析 | 第42页 |
| 3.2.5 免疫共沉淀法检测MDFIC和FAM76B两种蛋白在哺乳动物细胞中的相互作用 | 第42-45页 |
| 3.2.6 GST-pull down检测MDFIC和FAM76B蛋白在体外的相互作用 | 第45-47页 |
| 3.2.7 FAM76A、KRTAP4-12、IL-24和IL-24-His-repeat酵母双杂交检测 | 第47页 |
| 3.2.8 激光共聚焦检测MDFIC与FAM76B的细胞共定位 | 第47-48页 |
| 3.3 实验结果 | 第48-59页 |
| 3.3.1 MDFIC基因的克隆及相关载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.3.2 FAM76B与MDFIC酵母双杂交验证 | 第49页 |
| 3.3.3 酵母双杂交分析MDFIC与FAM76B相互作用区域 | 第49-51页 |
| 3.3.4 MDFIC与FAM76B分子在细胞内定位的初步分析 | 第51-53页 |
| 3.3.5 免疫共沉淀鉴定FAM76B与MDFIC在哺乳动物细胞内的相互作用 | 第53-54页 |
| 3.3.6 GST-pull down检测FAM76B和MDFIC截短体蛋白在体外的相互作用 | 第54-56页 |
| 3.3.7 FAM76A、KRTAP4-12、IL-24和IL-24-His repeat与MDFIC蛋白分子酵母双杂交系统分析 | 第56-57页 |
| 3.3.8 激光共聚焦分析MDFIC与FAM76B的亚细胞共定位 | 第57-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-62页 |
| 第4章 MDFIC与FAM76B细胞功能的研究 | 第62-72页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第62-63页 |
| 4.1.1 质粒载体和细胞 | 第62页 |
| 4.1.2 主要材料和试剂 | 第62页 |
| 4.1.3 主要溶液的配置 | 第62-63页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第63页 |
| 4.2 实验方法 | 第63-67页 |
| 4.2.1 Real-time PCR检测MDFIC在不同肿瘤细胞中的内源表达 | 第63-65页 |
| 4.2.2 MTT法检测MDFIC与FAM76B对HepG2细胞生长的影响 | 第65-66页 |
| 4.2.3 MTT法检测高表达Axin蛋白对HepG2细胞生长的影响 | 第66页 |
| 4.2.4 MTT法分析在高表达Axin1时MDFIC与FAM76B对HepG2细胞生长的影响 | 第66-67页 |
| 4.3 实验结果 | 第67-72页 |
| 4.3.1 Real-time PCR检测不同肿瘤细胞中MDFIC的内源表达水平 | 第67页 |
| 4.3.2 MTT法检测MDFIC与FAM76B对HepG2细胞生长的影响 | 第67-68页 |
| 4.3.3 MTT法检测高表达Axin1对HepG2细胞活力的影响 | 第68-69页 |
| 4.3.4 MTT法分析在高表达Axin1时MDFIC与FAM76B对HepG2细胞活力的影响 | 第69页 |
| 4.3.5 讨论 | 第69-72页 |
| 结论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 附录 | 第80-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间研究成果 | 第85页 |
