| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-35页 |
| 1.1 小麦条锈病 | 第15页 |
| 1.2 条锈菌的生活史和侵染循环 | 第15-17页 |
| 1.3 植物的免疫反应 | 第17-21页 |
| 1.3.1 病原物诱导的免疫反应 | 第17-18页 |
| 1.3.2 基因对基因假说 | 第18-19页 |
| 1.3.3 活性氧迸发(ROS)与过敏性坏死反应(PCD) | 第19-20页 |
| 1.3.4 转录水平的免疫反应 | 第20-21页 |
| 1.4 病原菌的致病因子 | 第21-27页 |
| 1.4.1 信号传导类致病因子 | 第22-24页 |
| 1.4.2 侵染分化相关基因 | 第24-25页 |
| 1.4.3 效应蛋白 | 第25-27页 |
| 1.5 小麦对条锈病的抗性 | 第27-33页 |
| 1.5.1 Yr基因的克隆 | 第27页 |
| 1.5.2 抗性相关基因的功能分析 | 第27-29页 |
| 1.5.3 转录因子 | 第29-30页 |
| 1.5.4 转基因技术育种 | 第30-33页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第二章 条锈菌重要效应蛋白PstGSRE1功能鉴定 | 第35-64页 |
| 2.0 前言 | 第35页 |
| 2.1 材料、试剂及仪器 | 第35-36页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第35-36页 |
| 2.1.2 试剂及仪器 | 第36页 |
| 2.2 试验方法 | 第36-43页 |
| 2.2.1 效应蛋白基因的筛选及序列分析 | 第36-37页 |
| 2.2.2 PstGSRE1的转录表达分析 | 第37页 |
| 2.2.3 PstGSRE1的信号肽分泌验证 | 第37-38页 |
| 2.2.4 PstGSRE1的烟草瞬时过表达 | 第38页 |
| 2.2.5 PstGSRE1通过细菌三型分泌系统在小麦中过表达 | 第38-39页 |
| 2.2.6 PstGSRE1通过BSMV介导的基因沉默 | 第39页 |
| 2.2.7 PstGSRE1的酵母过表达分析 | 第39页 |
| 2.2.8 PstGSRE1的在小麦原生质体和烟草细胞中的定位情况分析 | 第39-40页 |
| 2.2.9 PstGSRE1通过酵母双杂交系统筛选寄主靶标 | 第40-41页 |
| 2.2.10 PstGSRE1与寄主靶标间的互作位点分析 | 第41页 |
| 2.2.11 PstGSRE1与靶标之间的共定位情况分析 | 第41页 |
| 2.2.12 PstGSRE1与靶标之间的体外互作(Pull-Down) | 第41-42页 |
| 2.2.13 PstGSRE1与靶标之间的免疫共沉淀分析(Co-IP) | 第42-43页 |
| 2.2.14 PstGSRE1多克隆抗体的制备 | 第43页 |
| 2.3 试验结果 | 第43-62页 |
| 2.3.1 PstGSRE1的序列分析 | 第43-44页 |
| 2.3.2 PstGSRE1的转录表达分析 | 第44-45页 |
| 2.3.3 PstGSRE1的信号肽分泌功能验证 | 第45-46页 |
| 2.3.4 PstGSRE1在烟草中抑制Bax诱导的过敏性坏死 | 第46-48页 |
| 2.3.5 PstGSRE1通过细菌三型分泌系统在小麦中过表达 | 第48-49页 |
| 2.3.6 PstGSRE1通过BSMV诱导的基因瞬时沉默 | 第49-51页 |
| 2.3.7 PstGSRE1-RNAi的转基因株系的抗病性鉴定 | 第51-53页 |
| 2.3.8 PstGSRE1-RNAi沉默株系的分子鉴定 | 第53-54页 |
| 2.3.9 PstGSRE1-RNAi的转基因株系的组织学分析 | 第54-56页 |
| 2.3.10 PstGSRE1的酵母过表达分析 | 第56-58页 |
| 2.3.11 PstGSRE1的在小麦原生质体和烟草细胞中的定位情况分析 | 第58页 |
| 2.3.12 PstGSRE1通过酵母双杂交系统筛选寄主靶标 | 第58-59页 |
| 2.3.13 PstGSRE1与寄主靶标间的互作位点分析 | 第59-60页 |
| 2.3.14 PstGSRE1与靶标之间的共定位情况分析 | 第60-61页 |
| 2.3.15 PstGSRE1与靶标之间的体外互作(Pull-Down) | 第61页 |
| 2.3.16 PstGSRE1与靶标之间的免疫共沉淀分析(Co-IP) | 第61-62页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第62-64页 |
| 第三章 小麦条锈菌重要效应子PstGSRE1调控小麦中靶标TaLOL2的免疫机理 | 第64-85页 |
| 3.0 前言 | 第64页 |
| 3.1 材料、试剂及仪器 | 第64-65页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第64页 |
| 3.1.2 试剂及仪器 | 第64-65页 |
| 3.2 试验方法 | 第65-66页 |
| 3.2.1 TaLOL2的序列分析 | 第65页 |
| 3.2.2 TaLOL2的转录表达分析 | 第65页 |
| 3.2.3 TaLOL2的亚细胞定位及结构域功能分析 | 第65页 |
| 3.2.4 TaLOL2的烟草瞬时过表达及结构域功能 | 第65页 |
| 3.2.5 TaLOL2在裂殖酵母中过表达分析 | 第65页 |
| 3.2.6 TaLOL2在小麦中过表达分析 | 第65-66页 |
| 3.2.7 TaLOL2在小麦中瞬时沉默分析 | 第66页 |
| 3.2.8 ChIP-Seq分析转录因子TaLOL2下游调控基因 | 第66页 |
| 3.3 试验结果 | 第66-82页 |
| 3.3.1 TaLOL2的序列分析 | 第66-67页 |
| 3.3.2 TaLOL2的转录表达分析 | 第67-68页 |
| 3.3.3 TaLOL2的亚细胞定位及结构域功能分析 | 第68-69页 |
| 3.3.4 TaLOL2的烟草瞬时过表达及结构域功能 | 第69-70页 |
| 3.3.5 TaLOL2在裂殖酵母中过表达分析 | 第70-71页 |
| 3.3.6 TaLOL2在小麦中过表达分析 | 第71页 |
| 3.3.7 TaLOL2在小麦中瞬时沉默分析 | 第71-74页 |
| 3.3.8 TaLOL2的ChIP-Seq结果分析 | 第74-77页 |
| 3.3.9 效应蛋白PstGSRE1对TaLOL2的影响分析 | 第77-80页 |
| 3.3.10 效应蛋白PstGSRE1对TaLOL2调控基因的影响分析 | 第80-82页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第82-85页 |
| 第四章 利用HIGS技术创建小麦持久抗锈病材料 | 第85-117页 |
| 4.0 前言 | 第85页 |
| 4.1 材料、试剂及仪器 | 第85-87页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第85页 |
| 4.1.2 试剂及仪器 | 第85-87页 |
| 4.2 试验方法 | 第87-97页 |
| 4.2.1 植物材料种植与接种 | 第87页 |
| 4.2.2 序列分析和进化树构建 | 第87页 |
| 4.2.3 总RNA的提取和cDNA第一条链的反转 | 第87-88页 |
| 4.2.4 实时荧光定量分析 | 第88页 |
| 4.2.5 稻瘟菌突变体互补 | 第88-89页 |
| 4.2.6 BSMV-VIGS介导的基因沉默 | 第89-91页 |
| 4.2.7 基因枪法进行小麦遗传转化 | 第91-93页 |
| 4.2.8 转基因小麦后代植株的抗锈性鉴定 | 第93页 |
| 4.2.9 转基因小麦后代植株的分子检测 | 第93-94页 |
| 4.2.10 转基因后代的Sourthern检测（同位素试验在上海植生所朱健康实验室进行） | 第94-95页 |
| 4.2.11 转基因后代的Northern检测 | 第95-97页 |
| 4.3 结果与分析 | 第97-113页 |
| 4.3.1 PstCPK1的序列分析和进化树构建 | 第97-99页 |
| 4.3.2 PstCPK1基因在锈菌侵染过程中的表达分析 | 第99-100页 |
| 4.3.3 PstCPK1互补稻瘟突变体 | 第100页 |
| 4.3.4 BSMV-VIGS体系诱导条锈菌PstCPK1基因沉默分析 | 第100-102页 |
| 4.3.5 PstCPK1转基因植株的加代及分子检测 | 第102-104页 |
| 4.3.6 PstCPK1转基因植株的抗锈病鉴定及Northern和Sourthern的分子鉴定 | 第104-107页 |
| 4.3.7 筛选出的PstCPK1转基因株系的抗锈病鉴定及分子检测 | 第107-109页 |
| 4.3.8 PstCPK1转基因沉默植株接菌后的组织细胞学分析 | 第109-110页 |
| 4.3.9 PstCPK1转基因沉默植株接菌后的分子生物学分析 | 第110-113页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第113-117页 |
| 第五章 全文结论 | 第117-120页 |
| 附录 | 第120-135页 |
| 参考文献 | 第135-145页 |
| 致谢 | 第145-146页 |
| 个人简介 | 第146页 |
