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森林草莓花青素下降突变体RAP基因的克隆与功能解析

摘要第7-9页
Abstract第9-11页
缩略词表第12-13页
1 文献综述第13-26页
    1.1 课题的提出第13页
    1.2 花青素的功能与种类第13-15页
    1.3 花青素的合成代谢分子机制第15-20页
        1.3.1 花青素合成途径中结构基因研究进展第15-17页
        1.3.2 花青素合成途径中转录因子研究进展第17-20页
    1.4 影响花青素积累的其他因素第20-22页
    1.5 花青素的转运第22-23页
    1.6 GST家族的研究进展第23-24页
    1.7 本课题的研究内容与意义第24-26页
2 材料与方法第26-48页
    2.1 植物材料和生长条件第26页
    2.2 培养基配方第26-28页
    2.3 主要试剂第28-29页
    2.4 草莓基因组DNA的提取第29-31页
    2.5 植物总RNA的提取与反转录第31-32页
    2.6 混池基因组重测序(Mapping-by-Sequencing)克隆突变基因第32-33页
    2.7 系统进化树分析第33页
    2.8 载体的构建第33-41页
        2.8.1 互补载体构建第33-37页
        2.8.2 启动子载体构建第37页
        2.8.3 干涉载体构建第37-38页
        2.8.4 过表达载体构建第38-39页
        2.8.5 置换载体的构建第39页
        2.8.6 RAP的CRISPR/Cas9载体的构建第39-41页
    2.9 农杆菌介导的烟草瞬时转化第41页
    2.10 农杆菌介导的草莓瞬时转化第41-42页
    2.11 农杆菌介导的拟南芥稳定转化与鉴定第42-43页
        2.11.1 拟南芥的稳定转化第42页
        2.11.2 阳性苗的筛选与鉴定第42-43页
    2.12 农杆菌介导的草莓稳定转化与鉴定第43-45页
        2.12.1 野生草莓的稳定转化第43-44页
        2.12.2 栽培草莓的稳定转化第44-45页
        2.12.3 阳性苗鉴定第45页
    2.13 实时定量PCR第45-46页
    2.14 花青素含量的测定第46页
    2.15 高效液相色谱分析第46-47页
    2.16 Gus染色第47-48页
3 结果与分析第48-69页
    3.1 rap突变体的表型与遗传学分析第48-50页
    3.2 RAP基因的克隆第50-51页
    3.3 RAP同源基因分析第51-52页
    3.4 RAP及其同源基因在草莓中的表达模式第52-53页
    3.5 RAP是草莓果实着色的重要调控基因第53-57页
    3.6 RAP是拟南芥TT19的直系同源基因第57-58页
    3.7 果实瞬时转化表明RAP能够恢复rap突变体表型第58-59页
    3.8 RAP同源蛋白不能转运花青素第59-61页
    3.9 RAP及其同源蛋白的亚细胞定位第61-62页
    3.10 RAP调控栽培草莓果实着色第62-64页
    3.11 RAP启动子驱动的GUS表达模式第64页
    3.12 在rap突变体中过表达RAP促进了花青素积累第64-67页
    3.13 栽培草莓RAP-CRISPR转基因植株幼苗叶柄花青素下降第67-69页
4 讨论第69-72页
    4.1 在草莓中RAP主要负责转运叶柄与果实中的花青素第69页
    4.2 草莓中MYB10在花青素合成中的作用第69-70页
    4.3 草莓中MYB10与RAP之间的关系第70页
    4.4 RAP在草莓栽培育种中的应用第70-72页
5 结论第72-73页
6 课题创新与工作展望第73-74页
参考文献第74-86页
附录第86-92页
作者简介第92-93页
致谢第93-94页

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