摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
缩略词表 | 第12-13页 |
1 文献综述 | 第13-26页 |
1.1 课题的提出 | 第13页 |
1.2 花青素的功能与种类 | 第13-15页 |
1.3 花青素的合成代谢分子机制 | 第15-20页 |
1.3.1 花青素合成途径中结构基因研究进展 | 第15-17页 |
1.3.2 花青素合成途径中转录因子研究进展 | 第17-20页 |
1.4 影响花青素积累的其他因素 | 第20-22页 |
1.5 花青素的转运 | 第22-23页 |
1.6 GST家族的研究进展 | 第23-24页 |
1.7 本课题的研究内容与意义 | 第24-26页 |
2 材料与方法 | 第26-48页 |
2.1 植物材料和生长条件 | 第26页 |
2.2 培养基配方 | 第26-28页 |
2.3 主要试剂 | 第28-29页 |
2.4 草莓基因组DNA的提取 | 第29-31页 |
2.5 植物总RNA的提取与反转录 | 第31-32页 |
2.6 混池基因组重测序(Mapping-by-Sequencing)克隆突变基因 | 第32-33页 |
2.7 系统进化树分析 | 第33页 |
2.8 载体的构建 | 第33-41页 |
2.8.1 互补载体构建 | 第33-37页 |
2.8.2 启动子载体构建 | 第37页 |
2.8.3 干涉载体构建 | 第37-38页 |
2.8.4 过表达载体构建 | 第38-39页 |
2.8.5 置换载体的构建 | 第39页 |
2.8.6 RAP的CRISPR/Cas9载体的构建 | 第39-41页 |
2.9 农杆菌介导的烟草瞬时转化 | 第41页 |
2.10 农杆菌介导的草莓瞬时转化 | 第41-42页 |
2.11 农杆菌介导的拟南芥稳定转化与鉴定 | 第42-43页 |
2.11.1 拟南芥的稳定转化 | 第42页 |
2.11.2 阳性苗的筛选与鉴定 | 第42-43页 |
2.12 农杆菌介导的草莓稳定转化与鉴定 | 第43-45页 |
2.12.1 野生草莓的稳定转化 | 第43-44页 |
2.12.2 栽培草莓的稳定转化 | 第44-45页 |
2.12.3 阳性苗鉴定 | 第45页 |
2.13 实时定量PCR | 第45-46页 |
2.14 花青素含量的测定 | 第46页 |
2.15 高效液相色谱分析 | 第46-47页 |
2.16 Gus染色 | 第47-48页 |
3 结果与分析 | 第48-69页 |
3.1 rap突变体的表型与遗传学分析 | 第48-50页 |
3.2 RAP基因的克隆 | 第50-51页 |
3.3 RAP同源基因分析 | 第51-52页 |
3.4 RAP及其同源基因在草莓中的表达模式 | 第52-53页 |
3.5 RAP是草莓果实着色的重要调控基因 | 第53-57页 |
3.6 RAP是拟南芥TT19的直系同源基因 | 第57-58页 |
3.7 果实瞬时转化表明RAP能够恢复rap突变体表型 | 第58-59页 |
3.8 RAP同源蛋白不能转运花青素 | 第59-61页 |
3.9 RAP及其同源蛋白的亚细胞定位 | 第61-62页 |
3.10 RAP调控栽培草莓果实着色 | 第62-64页 |
3.11 RAP启动子驱动的GUS表达模式 | 第64页 |
3.12 在rap突变体中过表达RAP促进了花青素积累 | 第64-67页 |
3.13 栽培草莓RAP-CRISPR转基因植株幼苗叶柄花青素下降 | 第67-69页 |
4 讨论 | 第69-72页 |
4.1 在草莓中RAP主要负责转运叶柄与果实中的花青素 | 第69页 |
4.2 草莓中MYB10在花青素合成中的作用 | 第69-70页 |
4.3 草莓中MYB10与RAP之间的关系 | 第70页 |
4.4 RAP在草莓栽培育种中的应用 | 第70-72页 |
5 结论 | 第72-73页 |
6 课题创新与工作展望 | 第73-74页 |
参考文献 | 第74-86页 |
附录 | 第86-92页 |
作者简介 | 第92-93页 |
致谢 | 第93-94页 |