| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 1.实验材料 | 第16-24页 |
| 1.1 主要材料试剂 | 第16-17页 |
| 1.2 试剂配制 | 第17-22页 |
| 1.3 仪器设备 | 第22-24页 |
| 2.实验方法 | 第24-42页 |
| 2.1 细胞培养实验 | 第24-26页 |
| 2.1.1 细胞生长条件 | 第24页 |
| 2.1.2 细胞复苏 | 第24页 |
| 2.1.3 细胞换液 | 第24页 |
| 2.1.4 细胞传代 | 第24-25页 |
| 2.1.5 细胞冻存 | 第25页 |
| 2.1.6 B104细胞条件培养基的制备 | 第25页 |
| 2.1.7 CG4细胞生长培养基的制备 | 第25-26页 |
| 2.1.8 CG4细胞分化培养基的制备 | 第26页 |
| 2.2 RT-PCR | 第26-28页 |
| 2.2.1 细胞中总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 反转录PCR合成cDNA第一链 | 第27-28页 |
| 2.2.3 PCR扩增MBP | 第28页 |
| 2.3 细胞中基因组DNA的提取(高盐法) | 第28-29页 |
| 2.4 感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.5 SIRT2瞬时过表达HEK293与CG4细胞系的构建 | 第30-31页 |
| 2.6 核质分离实验 | 第31页 |
| 2.7 染色质免疫共沉淀及PCR | 第31-34页 |
| 2.7.1 细胞交联固定及超声破碎处理 | 第31-32页 |
| 2.7.2 免疫沉淀 | 第32页 |
| 2.7.3 解交联 | 第32-33页 |
| 2.7.4 ChIP引物的设计 | 第33-34页 |
| 2.7.5 PCR扩增 | 第34页 |
| 2.8 DNA甲基化检测 | 第34-39页 |
| 2.8.1 基因组DNA的亚硫酸盐(Bisulfite)处理 | 第34-35页 |
| 2.8.2 甲基化引物的设计与PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.8.3 目的片段的胶回收 | 第36-37页 |
| 2.8.4 T载体连接与蓝白斑筛选 | 第37-38页 |
| 2.8.5 质粒提取与酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 2.8.6 甲基化序列的比对 | 第39页 |
| 2.9 WESTERNBLOT实验 | 第39-41页 |
| 2.9.1 蛋白样品的收集 | 第39页 |
| 2.9.2 Western blot实验方法 | 第39-41页 |
| 2.10 SIRT2与PDGFRα瞬时沉默CG4细胞系的构建 | 第41页 |
| 2.11 测定CG4细胞的生长曲线 | 第41-42页 |
| 3.实验结果 | 第42-54页 |
| 3.1 SIRT2在GM/DM条件下的CG4细胞中的定位 | 第42-45页 |
| 3.1.1 CG4在GM/DM条件下的细胞形态 | 第42页 |
| 3.1.2 MBP在DM条件下的CG4细胞中的表达情况 | 第42-43页 |
| 3.1.3 SIRT2-pEGFP-c2与pEGFP-c2质粒的转染及核质分离实验结果 | 第43-45页 |
| 3.2 CHIP实验鉴定SIRT2与PDGFRα的启动子区相互作用 | 第45-46页 |
| 3.3 SIRT2对PDGFRα去乙酰化的影响 | 第46-50页 |
| 3.3.1 SIRT2与PDGFRα在HEK293与CG4细胞中的表达情况 | 第46-47页 |
| 3.3.2 SIRT2过表达时PDGFRα的表达情况 | 第47-48页 |
| 3.3.3 SIRT2对PDGFRα启动子区组蛋白乙酰化水平的影响 | 第48-50页 |
| 3.4 SIRT2对PDGFRα启动子区甲基化的影响 | 第50-52页 |
| 3.4.1 PDGFRα的PCR扩增、T载体连接及酶切结果 | 第50-51页 |
| 3.4.2 PDGFRα序列的甲基化数据分析 | 第51-52页 |
| 3.5 SIRT2过表达、沉默与PDGFRα沉默对CG4细胞增殖的影响 | 第52-54页 |
| 3.5.1 siRNA干扰SIRT2与PDGFRα瞬时转染CG4细胞的Western blot验证 | 第52-53页 |
| 3.5.2 细胞增殖曲线 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-56页 |
| 讨论 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 综述 | 第68-86页 |
| 参考文献 | 第82-86页 |
