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基于Y2H的稻瘟病抗性基因Pik与其相应无毒基因AvrPik的互作研究

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
缩写词及其英汉对照第8-12页
1 前言第12-20页
    1.1 水稻稻瘟病抗病性的研究第12-13页
        1.1.1 稻瘟病抗性基因研究的意义第12-13页
        1.1.2 稻瘟病抗性的类型第13页
    1.2 NBS-LRR类抗病蛋白的结构与功能第13-14页
        1.2.1 N-末端CC结构域第13-14页
        1.2.2 NBS结构域第14页
        1.2.3 LRR结构域第14页
        1.2.4 Ct NL(C末端非LRR区域)结构域第14页
    1.3 植物先天免疫的防御体系第14-16页
    1.4 植物抗病基因与病原菌相对应无毒基因之间的识别机制第16-18页
        1.4.1 直接互作模式第16页
        1.4.2 间接互作模式第16-18页
    1.5 酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system, Y2H)简介第18页
        1.5.1 酵母双杂交系统的原理第18页
        1.5.2 酵母双杂交系统的应用第18页
    1.6 本研究的目的及主要内容第18-20页
2 材料与方法第20-27页
    2.1 实验材料第20-21页
        2.1.1 菌物材料第20页
        2.1.2 基因材料第20页
        2.1.3 主要试剂第20页
        2.1.4 主要仪器设备第20-21页
    2.2 实验方法第21-27页
        2.2.1 Y2H载体构建第21-23页
        2.2.2 TA克隆的构建第23-24页
        2.2.3 定点突变第24-25页
        2.2.4 酵母双杂交(yeast two-hybrid, Y2H)第25-26页
        2.2.5 亚细胞定位第26-27页
3 结果与分析第27-46页
    3.1 Avr Pik与Pik位点5个等位基因在全长及CC结构域的互作第27页
    3.2 Pik-1 及Pikp-1 的CC结构域的活性鉴定第27-29页
        3.2.1 Pik-1 等位基因蛋白CC结构域的二级结构预测第27-28页
        3.2.2 基于Y2H的Pik-1 及Pikp-1 CC结构域截短蛋白与无毒蛋白的互作第28-29页
    3.3 CC结构域内最小活性片段的鉴定第29-35页
        3.3.1 Pik-1/Pikp-1_(CC(1-97))基序的再截短第29-31页
        3.3.2 Pikp-1_(CC(131-190))基序的再截短第31-32页
        3.3.3 Pik-1_(CC(191-264))基序的再截短第32-34页
        3.3.4 Pikp-1_(CC(191-264))基序的再截短第34-35页
    3.4 CC结构域内功能性特异位点的鉴定第35-44页
        3.4.1 Pik-1 与Pikp-1 在CC_(131-190)范围内特异性位点的鉴定第36-38页
        3.4.2 Pik-1 与Pikp-1 在CC_(191-264)范围内特异性位点的鉴定第38-44页
    3.5 Pik-1 及Pikp-1 CC结构域有关片段的亚细胞定位第44-46页
4 讨论第46-50页
    4.1 稻瘟病抗性基因Pik家族的应用第46页
    4.2 Pik位点在进化上的分化第46-47页
    4.3 Pik位点蛋白体外互作的分析第47-48页
    4.4 Pik等位基因的亚细胞定位分析第48页
    4.5 本研究的创新点第48页
    4.6 下一步的研究设想第48-50页
参考文献第50-60页
附录A:实验方法第60-68页
附录B:本研究所用引物总表第68-73页
致谢第73-74页
作者简介第74-75页
导师简介第75页

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