| 摘要 | 第8-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 缩略语表 | 第16-17页 |
| 1 前言 | 第17-39页 |
| 1.1 细菌素 | 第17-33页 |
| 1.1.1 细菌素的简介及分类 | 第17-19页 |
| 1.1.2 羊毛硫细菌素 | 第19-24页 |
| 1.1.3 Sactipeptide类细菌素 | 第24-27页 |
| 1.1.4 细菌素的作用方式 | 第27-30页 |
| 1.1.4.1 作用细胞被膜的机制 | 第27-30页 |
| 1.1.4.2 抑制细菌体内代谢过程的机制 | 第30页 |
| 1.1.5 细菌素的应用 | 第30-33页 |
| 1.1.5.1 细菌素在食品行业的应用 | 第31-32页 |
| 1.1.5.2 细菌素在医药行业的应用 | 第32-33页 |
| 1.1.6 基于基因组学预测、挖掘新型细菌素的研究 | 第33页 |
| 1.2 蜡状芽胞杆菌种群 | 第33-38页 |
| 1.2.1 蜡状芽胞杆菌种群的组成 | 第33-34页 |
| 1.2.2 蜡状芽胞杆菌种群中细菌素的研究概况 | 第34-38页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第38-39页 |
| 2 材料和方法 | 第39-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-43页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和引物 | 第39-41页 |
| 2.1.2 使用抗生素 | 第41-42页 |
| 2.1.3 培养基 | 第42页 |
| 2.1.4 试剂和仪器 | 第42-43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-52页 |
| 2.2.1 DNA常规操作 | 第43-44页 |
| 2.2.1.1 苏云金芽胞杆菌总DNA的制备 | 第43-44页 |
| 2.2.1.2 DNA的体外重组操作 | 第44页 |
| 2.2.1.3 苏云金芽胞杆菌感受态细胞的制备及电转化 | 第44页 |
| 2.2.2 RNA的提取及反转录PCR | 第44-46页 |
| 2.2.2.1 Trizol提取苏云金芽胞杆菌总RNA | 第44-45页 |
| 2.2.2.2 RNA的消化 | 第45页 |
| 2.2.2.3 反转录PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR) | 第45-46页 |
| 2.2.3 细菌素合成基因簇的预测及羊毛硫细菌素合成基因簇的分类 | 第46页 |
| 2.2.4 细菌素合成基因簇中启动子与终止子的预测 | 第46-47页 |
| 2.2.5 抑菌活性测定 | 第47页 |
| 2.2.5.1 琼脂扩散法 | 第47页 |
| 2.2.5.2 微量稀释法测定最低抑菌活性浓度 | 第47页 |
| 2.2.6 抑菌活性物质的纯化、鉴定 | 第47-49页 |
| 2.2.6.1 抑菌物质产生时期的验证 | 第47-48页 |
| 2.2.6.2 抑菌物质粗提液制备 | 第48页 |
| 2.2.6.3 HPLC分析 | 第48-49页 |
| 2.2.6.4 质谱分析 | 第49页 |
| 2.2.7 抑菌物质理化性质测定 | 第49-50页 |
| 2.2.7.1 蛋白酶对活性的影响 | 第49页 |
| 2.2.7.2 温度对活性的影响 | 第49-50页 |
| 2.2.7.3 pH对活性的影响 | 第50页 |
| 2.2.8 细菌素抑制芽胞萌发的测定 | 第50页 |
| 2.2.9 菌落总数(CFU/mL)的测定方法 | 第50页 |
| 2.2.10 产耐酸碱、高温的细菌素的菌株筛选 | 第50-51页 |
| 2.2.11 插入突变体库的构建 | 第51页 |
| 2.2.12 抗Thuricin 67突变体的筛选方法 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-91页 |
| 3.1 蜡状芽胞杆菌种群中细菌素合成基因簇的预测及分类 | 第52-53页 |
| 3.2 羊毛硫细菌素的研究 | 第53-85页 |
| 3.2.1 羊毛硫细菌素Thuricin 4A-4及Thuricin 4A-4D的功能验证 | 第55-65页 |
| 3.2.1.1 羊毛硫细菌素Thuricin 4A合成基因簇的生物信息学分析 | 第55-57页 |
| 3.2.1.2 羊毛硫细菌素Thuricin 4A合成基因簇的转录验证 | 第57-58页 |
| 3.2.1.3 羊毛硫细菌素Thuricin 4A合成基因簇的异源表达 | 第58-59页 |
| 3.2.1.4 Thuricin 4A-4及Thuricin 4A-4D的纯化及鉴定 | 第59-61页 |
| 3.2.1.5 Thuricin 4A-4及Thuricin 4A-4D的理化性质测定 | 第61-62页 |
| 3.2.1.6 Thuricin 4A-4及Thuricin 4A-4D抑菌活性的测定 | 第62-63页 |
| 3.2.1.7 thiI基因的功能验证 | 第63-65页 |
| 3.2.2 羊毛硫细菌素Ticin的功能验证 | 第65-74页 |
| 3.2.2.1 筛选分泌耐高温及酸碱抑菌活性物质的B.cereus group菌株 | 第65-66页 |
| 3.2.2.2 B.thuringiensis BMB3201基因组测序及细菌素合成基因簇的分析 | 第66页 |
| 3.2.2.3 抑菌活性物质的纯化、鉴定 | 第66-70页 |
| 3.2.2.6 Ticin A1,Ticin A3及Ticin A4抑菌活性的测定 | 第70-72页 |
| 3.2.2.7 抑菌物质的稳定性测定 | 第72-74页 |
| 3.2.2.8 抑菌物质的作用模式 | 第74页 |
| 3.2.3 双组份羊毛硫细菌素Thusin的功能验证 | 第74-85页 |
| 3.2.3.1 双组份羊毛硫细菌素Thusin合成基因簇的生物信息学分析 | 第74-76页 |
| 3.2.3.2 Thusin的纯化、鉴定 | 第76-80页 |
| 3.2.3.3 Thsα与Thsβ最佳作用比例的验证 | 第80-81页 |
| 3.2.3.4 抑菌活性的测定 | 第81-83页 |
| 3.2.3.5 抑菌物质稳定性的测定 | 第83-84页 |
| 3.2.3.6 Thusin抑制芽胞萌发的测定 | 第84-85页 |
| 3.3 Sactipeptide类细菌素的研究 | 第85-91页 |
| 3.3.1 Thuricin 67合成基因簇的生物信息学分析 | 第85-86页 |
| 3.3.2 Thuricin 67合成基因簇的克隆及异源表达 | 第86页 |
| 3.3.3 活性物质的纯化、鉴定 | 第86-88页 |
| 3.3.4 Thuricin 67抑菌活性的鉴定 | 第88-90页 |
| 3.3.5 Thuricin 67作用靶标的鉴定 | 第90-91页 |
| 4 结论与讨论 | 第91-97页 |
| 参考文献 | 第97-107页 |
| 致谢 | 第107-109页 |
| 已发表和待发表文献 | 第109-110页 |
| 附表 | 第110-116页 |
