| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1 研究背景及意义 | 第10-12页 |
| 1.1 研究背景 | 第10-11页 |
| 1.2 研究意义 | 第11-12页 |
| 2 国内外研究现状和发展趋势 | 第12-15页 |
| 2.1 国内外研究现状 | 第12-15页 |
| 2.1.1 传统微生物培养检测技术及其改进 | 第12-13页 |
| 2.1.2 免疫学检测技术 | 第13页 |
| 2.1.3 分子检测技术 | 第13-15页 |
| 2.2 发展趋势 | 第15页 |
| 2.2.1 特定有害微生物分离与富集方法研究 | 第15页 |
| 2.2.2 多重检测技术与智能化检测技术研发 | 第15页 |
| 3 五种食源性致病菌的概述 | 第15-19页 |
| 3.1 沙门氏菌 | 第15-16页 |
| 3.2 单核增生李斯特菌 | 第16-17页 |
| 3.3 副溶血性弧菌 | 第17-18页 |
| 3.4 阪崎氏肠杆菌 | 第18页 |
| 3.5 金黄色葡萄球菌 | 第18-19页 |
| 4 本课题主要研究目标、拟解决问题 | 第19-20页 |
| 4.1 研究目标 | 第19页 |
| 4.2 拟解决问题 | 第19-20页 |
| 第二章 五种食源性致病菌的单重qPCR检测体系的建立 | 第20-36页 |
| 1 实验材料 | 第20-22页 |
| 1.1 实验菌株及其来源 | 第20页 |
| 1.2 实验仪器 | 第20-21页 |
| 1.3 培养基与试剂配置 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.1 菌种购买及活化 | 第22页 |
| 2.2 引物与探针 | 第22-23页 |
| 2.3 食源性致病菌的基因组DNA提取 | 第23-24页 |
| 2.4 PCR实验 | 第24-25页 |
| 2.4.1 体系探针浓度优化 | 第24页 |
| 2.4.2 普通PCR实验 | 第24页 |
| 2.4.3 qPCR实验 | 第24-25页 |
| 2.5 人工污染实验 | 第25-27页 |
| 2.5.1 人工污染牛奶样品中基因组DNA提取方法 | 第25-26页 |
| 2.5.2 人工污染面包样品中基因组DNA提取方法 | 第26-27页 |
| 2.5.3 人工污染面包样本的处理 | 第27页 |
| 2.6 实际样品的检测 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-34页 |
| 3.1 探针浓度优化 | 第28页 |
| 3.2 五种食源性致病菌的qPCR实验 | 第28-30页 |
| 3.3 样本模拟检测 | 第30-33页 |
| 3.3.1 牛奶的人工污染 | 第30-31页 |
| 3.3.2 面包的人工污染 | 第31-32页 |
| 3.3.3 单重qPCR体系的重复性 | 第32-33页 |
| 3.4 真实样品检测 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 5 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌的三重qPCR检测体系的建立 | 第36-46页 |
| 1 实验材料 | 第36-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第36页 |
| 1.2 培养基与试剂配置 | 第36-37页 |
| 2 实验方法 | 第37-40页 |
| 2.1 引物与探针 | 第37页 |
| 2.2 三重致病菌的基因组DNA提取 | 第37-38页 |
| 2.3 三重qPCR实验 | 第38页 |
| 2.4 三重PCR模拟样本检测 | 第38-39页 |
| 2.5 真实样品的前处理培养基的筛选 | 第39页 |
| 2.6 实际样品的检测 | 第39-40页 |
| 2.7 实际样品的检测 | 第40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-44页 |
| 3.1 三重qPCR实验 | 第40-41页 |
| 3.2 样本模拟及最低检测限 | 第41-42页 |
| 3.3 重复性 | 第42页 |
| 3.4 共增菌培养基的选择 | 第42-43页 |
| 3.5 海鲜样品的检测 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 5 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 微生物分子检测仪的应用 | 第46-55页 |
| 1 材料与方法 | 第46-49页 |
| 1.1 微生物分子检测仪 | 第46-47页 |
| 1.2 食品中有害微生物总核酸提取 | 第47-48页 |
| 1.2.1 样本处理 | 第47页 |
| 1.2.2 核酸富集 | 第47页 |
| 1.2.3 核酸纯化 | 第47-48页 |
| 1.3 荧光定量PCR体系的构建 | 第48页 |
| 1.4 智能化控制程序的开发 | 第48-49页 |
| 1.5 技术有效性评价 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-54页 |
| 2.1 微生物分子检测仪程序开发结果 | 第49-52页 |
| 2.2 有效性测试 | 第52页 |
| 2.3 稳定性测试 | 第52-54页 |
| 2.4 有效性评价 | 第54页 |
| 3 小结 | 第54-55页 |
| 结论与展望 | 第55-57页 |
| 1 结论 | 第55-56页 |
| 2 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录一 、海鲜样品的具体检测数据 | 第62-66页 |
| 附录二 、自动化微生物分子检测仪检验 | 第66-68页 |
| 附录三 、湖州市食品药品检验研究院检验报告 | 第68-69页 |
| 作者介绍 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
