| 缩略词 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 引言 | 第11-12页 |
| 1.2 PRRS流行病学 | 第12-16页 |
| 1.2.1 流行传播特点 | 第12-13页 |
| 1.2.2 临床症状 | 第13页 |
| 1.2.3 PRRS诊断方法 | 第13-15页 |
| 1.2.4 PRRS的防控 | 第15-16页 |
| 1.3 PRRSV病原特性 | 第16-18页 |
| 1.3.1 PRRSV分类 | 第16页 |
| 1.3.2 PRRSV形态及理化特性 | 第16-17页 |
| 1.3.3 PRRSV培养特性 | 第17页 |
| 1.3.4 PRRSV致病机理 | 第17-18页 |
| 1.4 PRRSV分子生物学特性 | 第18-21页 |
| 1.4.1 PRRSV基因组结构 | 第18-19页 |
| 1.4.2 PRRSV相关蛋白 | 第19-20页 |
| 1.4.3 PRRSV变异和重组 | 第20-21页 |
| 1.5 PRRSV疫苗研究进展 | 第21-22页 |
| 1.5.1 PRRSV灭活苗和弱毒苗 | 第21页 |
| 1.5.2 PRRSV新型疫苗 | 第21-22页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 河北省PRRSV分子流行病学调查 | 第24-42页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 试验样品 | 第24页 |
| 2.1.2 毒株、菌种及载体 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要试剂及耗材 | 第25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.5 试剂的配制 | 第26-27页 |
| 2.1.6 引物设计 | 第27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-32页 |
| 2.2.1 DH5α感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第27-28页 |
| 2.2.2 病料处理 | 第28页 |
| 2.2.3 RNA提取 | 第28-29页 |
| 2.2.4 RNA反转录 | 第29页 |
| 2.2.5 PCR检测 | 第29-30页 |
| 2.2.6 部分PRRSV阳性样品nsp2PCR产物回收纯化 | 第30页 |
| 2.2.7 DNA连接转化 | 第30-31页 |
| 2.2.8 重组质粒鉴定 | 第31页 |
| 2.2.9 nsp2基因测序及遗传进化分析 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-40页 |
| 2.3.1 PCR结果 | 第32-33页 |
| 2.3.2 PRRSV疑似阳性病料检测结果 | 第33-34页 |
| 2.3.3 PRRSV基因亚群检测结果 | 第34页 |
| 2.3.4 PRRSV nsp2基因克隆及测序 | 第34-35页 |
| 2.3.5 PRRSV nsp2高变区基因核苷酸序列及其推导氨基酸序列的同源性分析 | 第35-38页 |
| 2.3.6 PRRSV nsp2高变区推导氨基酸序列系统进化树分析 | 第38-39页 |
| 2.3.7 PRRSV nsp2高变区氨基酸序列对比 | 第39-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-41页 |
| 2.5 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 河北省PRRSV流行株分离鉴定 | 第42-50页 |
| 3.1 试验材料 | 第42-44页 |
| 3.1.1 疑似病料 | 第42页 |
| 3.1.2 细胞株和毒株 | 第42页 |
| 3.1.3 主要试剂耗材 | 第42-43页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第43页 |
| 3.1.5 试剂配制 | 第43-44页 |
| 3.2 试验方法 | 第44-45页 |
| 3.2.1 PAM细胞的制备 | 第44页 |
| 3.2.2 疑似PRRSV病料处理 | 第44页 |
| 3.2.3 疑似PRRSV病料RT-PCR初步检测 | 第44页 |
| 3.2.4 PRRSV在PAM细胞上增殖 | 第44-45页 |
| 3.2.5 PRRSV在Marc-145细胞上增殖 | 第45页 |
| 3.2.6 PRRSV分离株间接免疫荧光(IFA)鉴定 | 第45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-48页 |
| 3.3.1 RT-PCR检测 | 第45-46页 |
| 3.3.2 病毒的分离和传代 | 第46-47页 |
| 3.3.3 间接免疫荧光(IFA)鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-49页 |
| 3.5 小结 | 第49-50页 |
| 第四章 PRRSV QHD1株全基因组序列测定及分析 | 第50-63页 |
| 4.1 试验材料 | 第50-52页 |
| 4.1.1 毒株、菌种及载体 | 第50页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第50页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第50页 |
| 4.1.4 试剂配制 | 第50-51页 |
| 4.1.5 引物设计 | 第51-52页 |
| 4.2 试验方法 | 第52-54页 |
| 4.2.1 毒株处理 | 第52页 |
| 4.2.2 RNA提取 | 第52页 |
| 4.2.3 RNA反转录 | 第52页 |
| 4.2.4 PRRSVQHD-1株全基因扩增 | 第52-53页 |
| 4.2.5 PCR产物回收纯化及连接转化 | 第53页 |
| 4.2.6 重组质粒鉴定 | 第53页 |
| 4.2.7 序列测定与拼接 | 第53页 |
| 4.2.8 PRRSV QHD1株全基因序列分析 | 第53-54页 |
| 4.3 结果与分析 | 第54-61页 |
| 4.3.1 PRRSV QHD1株全基因扩增结果 | 第54页 |
| 4.3.2 PRRSV QHD1株全基因组片段克隆及序列拼接 | 第54-55页 |
| 4.3.3 PRRSV QHD1株基因组结构分析 | 第55-56页 |
| 4.3.4 PRRSV QHD1株各开放阅读框核苷酸序列同源性分析 | 第56-57页 |
| 4.3.5 PRRSV QHD1株nsp2氨基酸序列对比分析 | 第57-58页 |
| 4.3.6 PRRSV QHD1株全基因组同源性分析 | 第58-59页 |
| 4.3.7 PRRSV QHD1株全基因组系统进化树分析 | 第59-60页 |
| 4.3.8 PRRSV QHD1株重组分析 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-62页 |
| 4.5 小结 | 第62-63页 |
| 第五章 研究结论与创新性 | 第63-64页 |
| 5.1 研究结论 | 第63页 |
| 5.2 创新性 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
