| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-23页 |
| 1.1 前言 | 第14页 |
| 1.2 杜洛克猪、陆川猪及杂交F1代猪简介 | 第14-16页 |
| 1.3 骨骼肌的生长发育 | 第16-17页 |
| 1.3.1 骨骼肌的构造 | 第16页 |
| 1.3.2 骨骼肌的生长发育 | 第16-17页 |
| 1.3.3 影响猪骨骼肌生长发育的相关基因 | 第17页 |
| 1.4 启动子概述 | 第17-18页 |
| 1.5 表观遗传学概述 | 第18-20页 |
| 1.5.1 表观遗传学定义 | 第18页 |
| 1.5.2 DNA甲基化定义及分子机制 | 第18-19页 |
| 1.5.3 DNA甲基化检测方法 | 第19-20页 |
| 1.5.4 家畜中DNA甲基化的研究 | 第20页 |
| 1.6 WFIKKN2基因国内外研究进展 | 第20-22页 |
| 1.7 研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 猪WFIKKN2基因启动子生物信息学预测与活性分析 | 第23-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 实验样品 | 第23页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 实验质粒和菌株 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第24页 |
| 2.1.5 主要试剂配制方法 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-34页 |
| 2.2.1 猪WFIKKN2基因启动子信息学预测软件 | 第25页 |
| 2.2.2 猪背最长肌DNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第26页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.5 WFIKKN2基因启动子片段回收 | 第27-28页 |
| 2.2.6 胶回收片段连接 | 第28页 |
| 2.2.7 pMD-19T-WFIKKN2-promoter重组质粒的转化 | 第28页 |
| 2.2.8 pMD-19T-WFIKKN2-promoter重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.9 pMD-19T-WFIKKN2-promoter 重组质粒的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.10 pMD-19T-WFIKKN2-promoter重组质粒与pGL3-Basic载体的双酶切和回收 | 第30页 |
| 2.2.11 目的片段与载体的T4连接 | 第30-31页 |
| 2.2.12 pGL3-WFIKKN2-promoter重组质粒转化和鉴定 | 第31页 |
| 2.2.13 去内毒提取重组质粒 | 第31-32页 |
| 2.2.14 C2C12细胞的培养 | 第32-33页 |
| 2.2.15 pGL3-WFIKKN2-promoter 重组质粒转染 | 第33页 |
| 2.2.16 WFIKKN2基因启动子活性检测 | 第33-34页 |
| 2.2.17 启动子活性分析 | 第34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-43页 |
| 2.3.1 猪WFIKKN2基因启动子生物信息学预测 | 第34-36页 |
| 2.3.2 猪背最长肌组织DNA提取结果 | 第36-37页 |
| 2.3.3 WFIKKN2基因启动子PCR扩增以及菌液鉴定结果 | 第37-38页 |
| 2.3.4 pMD-19T-WFIKKN2-promoter重组质粒与pGL3-Basic载体的双酶切 | 第38-39页 |
| 2.3.5 pGL3-WFIKKN2-promoter 重组质粒的鉴定 | 第39页 |
| 2.3.6 四种猪WFIKKN2基因启动子序列比对 | 第39-42页 |
| 2.3.7 四种猪WFIKKN2基因启动子活性分析 | 第42-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-44页 |
| 2.5 小结 | 第44-45页 |
| 第三章 不同猪种背最长肌WFIKKN2基因启动子甲基化与mRNA表达量分析 | 第45-64页 |
| 3.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.1.1 实验样品 | 第45页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第45页 |
| 3.1.3 化学试剂 | 第45页 |
| 3.1.4 主要仪器和设备 | 第45-46页 |
| 3.1.5 主要试剂配制方法 | 第46页 |
| 3.2 实验方法 | 第46-52页 |
| 3.2.1 背最长肌总RNA提取 | 第46页 |
| 3.2.2 定量cDNA的合成 | 第46-47页 |
| 3.2.3 实时定量PCR的引物设计 | 第47页 |
| 3.2.4 相对荧光定量PCR | 第47-48页 |
| 3.2.5 DNA硫化处理 | 第48-49页 |
| 3.2.6 重亚硫酸盐处理后的DNA纯化 | 第49-50页 |
| 3.2.7 WFIKKN2基因启动子区CpG岛预测 | 第50页 |
| 3.2.8 BSP引物设计 | 第50页 |
| 3.2.9 启动子区CpG岛的扩增 | 第50-51页 |
| 3.2.10 CpG岛片段的回收、连接及转化 | 第51页 |
| 3.2.11 CpG岛整体甲基化率的检测和相关性分析 | 第51-52页 |
| 3.2.12 构建包含CpG岛的启动子缺失片段双荧光素酶报告基因载体 | 第52页 |
| 3.2.13 启动子缺失片段活性分析 | 第52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-62页 |
| 3.3.1 四种猪背最长肌总RNA的提取 | 第52-53页 |
| 3.3.2 WFIKKN2基因和GAPDH基因标准曲线的绘制 | 第53-54页 |
| 3.3.3 WFIKKN2基因在四种猪背最长肌组织中的mRNA表达量 | 第54-55页 |
| 3.3.4 WFIKKN2基因启动子CpG岛的预测 | 第55-56页 |
| 3.3.5 WFIKKN2基因启动子CpG岛的扩增 | 第56页 |
| 3.3.6 WFIKKN2基因CpG岛的整体甲基化水平 | 第56-58页 |
| 3.3.7 WFIKKN2基因CpG岛的单点甲基化水平 | 第58-59页 |
| 3.3.8 包含CpG岛的1126bp启动子缺失片段扩增 | 第59-60页 |
| 3.3.9 pMD-19T-WFIKKN2-1126重组质粒与pGL3-Basic载体的双酶切 | 第60-61页 |
| 3.3.10 pGL3-WFIKKN2-l 126 重组质粒的鉴定 | 第61页 |
| 3.3.11 pGL3-WFIKKN2-l 126重组质粒启动子活性分析 | 第61-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62-63页 |
| 3.5 小结 | 第63-64页 |
| 第四章 陆川猪WFIKKN2基因CDS区克隆、组织表达谱和不同组织甲基化分析 | 第64-79页 |
| 4.1 实验材料 | 第64-65页 |
| 4.1.1 实验样品 | 第64页 |
| 4.1.2 主要实验试剂 | 第64页 |
| 4.1.3 化学试剂 | 第64页 |
| 4.1.4 主要仪器和设备 | 第64页 |
| 4.1.5 主要试剂配制方法 | 第64-65页 |
| 4.2 实验方法 | 第65-68页 |
| 4.2.1 陆川猪各组织RNA的提取 | 第65页 |
| 4.2.2 陆川猪各组织cDNA的合成 | 第65-66页 |
| 4.2.3 WFIKKN2基因CDS区克隆 | 第66-67页 |
| 4.2.4 陆川猪WFIKKN2基因组织表达谱的构建 | 第67页 |
| 4.2.5 陆川猪心脏组织和肾脏组织WFIKKN2基因甲基化水平分析 | 第67-68页 |
| 4.3 结果与分析 | 第68-77页 |
| 4.3.1 陆川猪WFIKKN2基因CDS区扩增 | 第68页 |
| 4.3.2 陆川猪WFIKKN2基因CDS区序列分析 | 第68-69页 |
| 4.3.3 系统进化树构建 | 第69-70页 |
| 4.3.4 WFIKKN2蛋白理化性质分析 | 第70页 |
| 4.3.5 WFIKKN2蛋白跨膜区和蛋白信号肽预测 | 第70-71页 |
| 4.3.6 WFIKKN2蛋白疏水性分析 | 第71页 |
| 4.3.7 WFIKKN2蛋白二级和三级结构预测 | 第71-72页 |
| 4.3.8 WFIKKN2蛋白修饰结构的预测 | 第72-74页 |
| 4.3.9 WFIKKN2蛋白保守结构域预测和亚细胞定位分析 | 第74-75页 |
| 4.3.10 陆川猪WFIKKN2基因组织表达谱构建 | 第75页 |
| 4.3.11 陆川猪心脏和肾脏组织WFIKKN2基因甲基化水平分析 | 第75-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-78页 |
| 4.5 小结 | 第78-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第88页 |
